C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2381037
A method for detecting the presence of a target nucleic acid sequence in a sample, said method comprising subjecting said sample to an amplification reaction using a set of nucleotides, at least one of which is labelled with a first label, and a reagent comprising an amplification primer which can hybridise to said target sequence when in single stranded form and which is connected at its 5' end to a probe which carries a second label by way of a chemical linking group, said labelled probe being of a sequence which is similar to that of the said target sequence, such that it can hybridise to a complementary region in an amplification product, and wherein one of the first or the second label comprises a donor label and the other comprises an acceptor label, the donor label comprising a fluorescent molecule which is able to donate fluorescent energy to the acceptor label; and monitoring fluorescence of said sample. The method can be used to quantitate the amount of target nucleic acid in the sample as well as to determine sequence characteristics. Kits for effecting the method are also claimed.
L'invention concerne une méthode permettant de détecter la présence d'une séquence d'acide nucléique cible dans un échantillon. Cette méthode consiste à soumettre ledit échantillon à une réaction d'amplification au moyen d'un ensemble de nucléotides, dont au moins un comporte une première étiquette, et d'un réactif comprenant une amorce d'amplification qui peut s'hybrider avec ladite séquence cible lorsqu'elle se présente sous la forme à simple brin et qui est liée, au niveau de sa terminaison 5', à une sonde qui comporte une second étiquette, au moyen d'un groupe de liaison chimique. Ladite sonde étiquetée est issue d'une séquence semblable à celle de ladite séquence cible, de sorte qu'elle peut s'hybrider avec une région complémentaire dans un produit d'amplification. Soit la première, soit la seconde étiquette comprend une étiquette donneur tandis que l'autre comporte une étiquette accepteur, l'étiquette donneur comportant une molécule fluorescente capable de donner de l'énergie de fluorescence à l'étiquette accepteur. Cette méthode consiste ensuite à surveiller la fluorescence dudit échantillon. Cette méthode peut servir à déterminer la quantité d'acide nucléique cible se trouvant dans l'échantillon ainsi que les caractéristiques de la séquence. L'invention concerne également des trousses permettant de mettre en oeuvre cette méthode.
Lee Martin Alan
Leslie Dario Lyall
Fetherstonhaugh & Co.
The Secretary Of State For Defence
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1354931