C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2487538
The invention relates to methods for amplifying ribonucleic acids, comprising the following steps: (a) a DNA single strand is produced from an RNA by reverse transcription with the aid of a single-stranded primer having a defined sequence, an RNA-dependent DNA polymerase, and desoxyribonucleoside triphosphates; (b) the RNA is removed; (c) a DNA duplex is produced by means of a single-stranded primer comprising a box sequence, a DNA polymerase, and desoxyribonucleoside triphosphates; (d) the duplex is separated into single strands; (e) DNA duplexes are produced from one of the single strands obtained in step (d) by means of a single-stranded primer which comprises the sequence of a promoter in the 5' range and the same defined sequence as the primer used in step (a) in the 3' range, a DNA polymerase, and desoxyribonucleoside triphosphates; (f) a plurality of RNA single strands, both ends of which comprise defined sequences, are produced by means of an RNA polymerase and ribonucleoside triphosphates. The invention also relates to kits for amplifying ribonucleic acids according to one of said methods, said kits comprising the following components: at least one single-stranded primer comprising the sequence of a promoter; (b) at least one single-stranded primer comprising a box sequence; (c) an RNA-dependent DNA polymerase; (d) desoxyribonucleoside triphosphates; (e) a DNA-dependent DNA polymerase; (f) an RNA polymerase; and (g) ribonucleoside triphosphates.
L'invention concerne des procédés pour l'amplification d'acides ribonucléiques, comprenant les étapes suivantes dans lesquelles (a) on génère par transcription inverse un simple brin d'ADN à partir d'un ARN, au moyen d'une amorce simple brin de séquence définie, d'une ADN polymérase ARN dépendante et de désoxyribonucléosides triphosphates ; (b) on élimine l'ARN ; (c) on génère un double brin d'ADN au moyen d'une amorce simple brin comprenant une séquence boîte, d'une ADN polymérase et de désoxyribonucléosides triphosphates ; (d) on sépare le double brin en simples brins ; (e) on génère des doubles brins d'ADN à partir des simples brins produits en (d) au moyen d'une amorce simple brin, comprenant dans la zone 5' la séquence d'un promoteur et dans la zone 3' la même séquence définie que l'amorce en (a), d'une ADN polymérase et de désoxyribonucléosides triphosphates ; (f) on génère au moyen d'une ARN polymérase et de ribonucléosides triphosphates une pluralité de simples brins d'ARN qui comprennent des séquences définies aux deux extrémités. L'invention concerne en outre des trousses servant à amplifier des acides ribonucléiques selon l'un des procédés précédents et comprenant les éléments suivants : (a) au moins une amorce simple brin qui comprend la séquence d'un promoteur, (b) au moins une amorce simple brin qui comprend une séquence boîte, (c) une ADN polymérase ARN dépendante, (d) des désoxyribonucléosides triphosphates, (e) une ADN polymérase ADN dépendante, (f) une ARN polymérase et (g) des ribonucléosides triphosphates.
Krupp Guido
Scheinert Peter
Amptec Gmbh
Artus - Gesellschaft Fuer Molekularbiologische Diagnostik Und En
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1474831