C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/86 (2006.01) A61K 39/12 (2006.01) C12N 15/33 (2006.01)
Patent
CA 2201302
RNA polymerase I transcription in vivo in transiently DNA-transfected cells has been used for expression of influenza vRNA molecules coding for chloramphenicol acetyltransferase (CAT) in anti-sense orientation. Influenza virus superinfection served to provide viral RNA polymerase and other proteins for transcriptional conversion of minus-strand vRNA into plus-strand viral mRNA molecules expressing CAT activity. This system has been used for an analysis via nucleotide exchanges as well as deletions and insertions of both terminal segments of the vRNA sequence which cooperatively constitute the vRNA promoter structure. Several mutants with greatly enhanced expression rates over wild-type levels have been constructed, which also can be packaged and serially passaged into progeny virus. The data obtained for the mutations in various promoter elements support a model of consecutive, doublestrand vRNA promoter structures in binding of viral polymerase and initiation of RNA synthesis. Preparations of attenuated influenza virus for vaccination purposes include a single recombinant segment with promoter up mutation(s) for over- expression of an own or foreign gene product, which at the same time because of its over-replication serves to decrease the number of helper virus RNP segments. The same viruses further have been passaged through a step of ribozyme cleavage acting at one of the helper viral segments, which will delete this vital function and structure with high rates from the virus progeny. The resulting attenuated viruses will interact with their target cells in only one round of abortive infection, and are unable to produce viral progeny.
On a utilisé la transcription in vivo de l'ARN polymérase I dans des cellules transfectées de manière transitoire par de l'ADN, pour l'expression de molécules d'ARNv de la grippe codant pour la chloramphénicol-acétyltransférase (CAT) dans une orientation antisens. La surinfection à virus grippal a servi à obtenir une ARN polymérase virale ainsi que d'autres protéines destinées à la conversion par transcritpion d'ARNv à brin moins en molécules d'ARNm viral à brin plus exprimant l'activité de CAT. On a utilisé ce système pour une analyse par des échanges nucléotidiques ainsi que des délétions et insertions des deux segments terminaux de la séquence d'ARNv constituant de manière coopérative la structure du promoteur d'ARNv. On a formé plusieurs mutants présentant des taux d'expression notablement accrus par rapport aux niveaux de type sauvage, que l'on peut également encapsider et faire passer en série dans un virus de descendance. Les données obtenues pour les mutations dans divers éléments promoteurs permettent l'élaboration d'un modèle de structures consécutives de promoteur d'ARNv bicaténaire pour lier la polymérase virale et initier la synthèse de l'ARN. Des préparations du virus atténué de la grippe à des fins de vaccination comprennent un seul segment recombiné présentant une ou des mutation(s) favorisante(s) du promoteur aux fins de surexpression d'un produit génique propre ou étranger, lequel sert en même temps, étant donné sa sur-réplication, à diminuner le nombre de segments de la ribonucléoprotéine du virus auxiliaire. On a fait passer à nouveau les mêmes virus par une étape de clivage de ribozyme agissant au niveau d'un des segments viraux auxiliaires, laquelle supprime cette fonction et cette structure vitales, avec des taux élevés, de la descendance du virus. Les virus atténués obtenus ont une interaction avec leurs cellules cibles en un seul cycle d'infection avortée et ils sont incapables de produire une descendance virale.
Hobom Gerd
Menke Annette
Neumann Gabriele
Aktiengesellschaft Bayer
Fetherstonhaugh & Co.
Hobom Gerd
LandOfFree
An attenuated vaccination and gene-transfer virus, a method... does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with An attenuated vaccination and gene-transfer virus, a method..., we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and An attenuated vaccination and gene-transfer virus, a method... will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1583866