C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/00 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01)
Patent
CA 2524912
The present invention provides methods for high level, regulated transgene transcription that is restricted to cell populations of specific types. The process is designed to work with any inducible expression regulation systems, adapting them to a tissue-specific expression pattern while simultaneously delivering maximal achievable expression levels. In particular, the invention utilizes hybrid promoters that contain the DNA elements for both cell type- specific and regulated transcription. By placing the gene of the transcriptional activation factor (TAF) under the control of this tissue- specific/drug-regulated (TSDR) promoter, this invention achieves high expression levels of TAF in specific target cells by first initiating TAF expression using cell-type specific transcription elements, and subsequently amplifying transcriptional activity by establishing an autoregulatory positive feedback loop. In non-target cells, cell type-specific elements of the TSDR promoter will be inactive, the TAF expression will not be initiated, and auto- regulation will not occur. For cell type-specifc promoters with leaky low- level activity in non-target cells, a variation of this system has been developed which combines autologous upregulation of TAF with the expression of cross-competing transcriptional silencers (TSi) to achieve a type of eukaryotic ~gene switch~ - either shutting off transgene and TAF expression completely or promoting maximal expression levels.
La présente invention concerne des méthodes de transcription du transgène régulée de haut niveau, se limitant à des populations cellulaires de types spécifiques. Le procédé est conçu pour fonctionner avec n'importe quel système de régulation d'expression inductible, permettant de l'adapter à un schéma d'expression spécifique du tissu tout en fournissant des niveaux d'expression maximaux réalisables. L'invention utilise plus particulièrement des promoteurs hybrides contenant des éléments d'ADN pour la transcription régulée et spécifique du type de cellule. En plaçant le gène du facteur d'activation de transcription (TAF) sous le contrôle de ce promoteur régulé/spécifique du tissu (TSDR), la présente invention permet d'obtenir des niveaux d'expression élevée du TAF dans des cellules cibles spécifiques en lançant l'expression du TAF à l'aide des éléments de transcription spécifiques du type de cellule, puis en amplifiant par la suite l'activité transcriptionnelle en établissant une boucle de réaction positive autorégulée. Dans les cellules non recherchées, les éléments spécifiques du type de cellule du promoteur TSDR seront inactifs, l'expression de TAF ne sera pas lancée, et il n'y aura pas d'autorégulation positive. Pour les promoteurs spécifiques du type de cellule avec une activité faible partiellement fonctionnelle dans des cellules non recherchées. une variation de ce système a été développée, combinant une régulation positive autologue du TAF à l'expression de silenceurs de transcription concurrents (TSi) pour obtenir un type de <= commutateur génétique >= eucaryote qui coupe complètement l'expression du transgène et du TAF ou fournit des niveaux d'expression maximaux, selon le niveau d'activité de départ du promoteur spécifique dans la cellule.
Dong Jian-Yun
Rubinchik Semyon
Woraratanadharm Jan
Bcf Llp
Musc Foundation For Research Development
LandOfFree
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