C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/82 (2006.01)
Patent
CA 2710262
Method for targeted alteration of a duplex acceptor DNA sequence in a plant cell protoplast, comprising combining the duplex acceptor DNA sequence with a donor mutagenic nucleobase, wherein the duplex acceptor DNA sequence contains a first DNA sequence and a second DNA sequence which is the complement of the first DNA sequence and wherein the donor mutagenic nucleobase comprises at least one mismatch with respect to the duplex acceptor DNA sequence to be altered, preferably with respect to the first DNA sequence, wherein the method further comprises a step of introducing the donor mutagenic nucleobase into the cell protoplasts using polyethylene glycol (PEG) mediated transformation and the use of PEG protoplast transformation for enhancing the rate of targeted mutagenesis.
L'invention se rapporte à un procédé pour l'altération ciblée d'une séquence d'ADN du duplex accepteur dans un protoplaste de cellule végétale qui comprend l'association de la séquence d'ADN du duplex accepteur et d'une base azotée mutagène donneuse, la séquence d'ADN du duplex accepteur contenant une première séquence d'ADN et une seconde séquence d'ADN complémentaire à la première, et la base azotée mutagène donneuse comprenant au moins un mésappariement par rapport à la séquence d'ADN du duplex accepteur à modifier, de préférence par rapport à la première séquence d'ADN. Le procédé comprend en outre une étape consistant à introduire la base azotée mutagène donneuse dans les protoplastes des cellules en recourant à une transformation médiée par du polyéthylène glycol (PEG) et à une transformation des protoplastes par du PEG afin d'augmenter le taux de mutagenèse ciblée.
Bundock Paul
de Both Michiel Theodoor Jan
Lhuissier Franck
Keygene N.v.
Ridout & Maybee Llp
LandOfFree
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