C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 7/00 (2006.01) A61K 39/155 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C07K 14/115 (2006.01) C12N 15/45 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01) C12N 5/06 (2006.01) C12N 5/08 (2006.01)
Patent
CA 2289776
A system for generating recombinant, human parainfluenza virus, particularly infectious, recombinant, human parainfluenza virus type 3(HPIV-3) is provided. In one embodiment, the system comprises a clone comprising a nucleotide sequence that encodes a full-length, positive sense, anti-genome of HPIV, and at least one support clone comprising a nucleotide sequence that encodes the HPIV P protein and the HPIV L protein. In another embodiment, the system further comprises a support clone which comprises a nucleotide sequence that encodes the HPIV NP protein. The present invention also provides a clone which comprises a nucleotide sequence encoding the full-length, positive sense, anti-genome of HPIV-3. The clone also comprises an RNA polymerase promoter operatively linked to the HPIV-3 antigenome-encoding sequence. In a preferred embodiement, the clone further comprises a nucleotide sequence which encodes a ribozyme immediately downstream from the sequence encoding the HPIV-3 anti- genome. The present invention also relates to a method of preparing recombinant HPIV-3 virus having site-specific mutations in the HPIV-3 genome. The method comprises preparing a clone comprising a modified HPIV-3 antigenome-encoding sequence; introducing the modified HPIV-3 clone and support clones which comprise nucleotide sequences encoding an HPIV-3 P protein, an HPIV-3 L protein, and, preferably, an HPIV-3 NP protein into host cells; and culturing the host cells under conditions that allow for synthesis of the modified HPIV-3 antigenome and the L, P, and NP proteins of HPIV-3.
Cette invention se rapporte à un système de génération d'un virus parainfluenza recombiné d'origine humaine, et notamment du virus parainfluenza de type 3 (HPIV-3) d'origine humaine, recombiné, infectieux. Selon une réalisation, ce système comporte un clone comprenant une séquence nucléotidique qui code un anti-genome, de sens positif, pleine longueur, du HPIV et au moins un clone support comprenant une séquence nucléotidique qui code la protéine P du HPIV et la protéine L du HPIV. Selon une autre réalisation, le système comporte également un clone support qui comprend une séquence nucléotidique qui code la protéine NP du HPIV. La présente invention se rapporte également à un clone qui comporte une séquence nucléotidique codant l'anti-génome, de sens positif, pleine longueur, de HPIV-3. Ce clone comporte également un promoteur d'ARN polymérase lié à la séquence de codage de l'anti-génome du HPIV-3. Dans une réalisation préférée, le clone comporte également une séquence nucléotidique qui code un ribozyme situé immédiatement en aval de la séquence codant l'anti-génome du HPIV-3. La présente invention se rapporte à un procédé de préparation du virus recombiné de HPIV-3 présentant des mutations spécifiques d'un site dans le génome du HPIV-3. Ce procédé consiste à préparer un clone comportant une séquence modifiée codant l'anti-génome de HPIV-3; à introduire dans des cellules hôtes le clone modifié de HPIV-3 et des clones de support qui comportent des séquences nucléotidiques codant une protéine P de HPIV, une protéine L de HPIV et de préférence une protéine NP de HPIV; et à cultiver les cellules hôtes dans des conditions favorables à la synthèse de l'anti-génome modifié de HPIV et des protéines L, P et NP de HPIV-3.
Banerjee Amiya K.
Hoffman Michael A.
Smart & Biggar
The Cleveland Clinic Foundation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1359926