C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/00 (2006.01) C12Q 1/62 (2006.01) G01N 27/447 (2006.01)
Patent
CA 2165082
A method for detecting an analyte in a sample uses both the specificity of an enzymatic reaction and the separation power of capillary electrophoresis. In general, the method comprises: (1) subjecting a first aliquot of the sample to an analytical technique such as capillary electrophoresis, which generates a first output such as an electropherogram; (2) reacting a second aliquot of the sample in an enzyme- catalyzed reaction converting the analyte into a product, the product being detectable by the analytical technique; (3) subjecting the second aliquot to the analytical technique to generate a second output; (4) in the case of electrophoresis, measuring the absorbance of the first and second outputs (electropherograms) as a function of migration distance along the electrophoresis at at least one wavelength at which either the analyte or the product absorbs to produce a first absorbance scan and a second absorbance scan; and (5) comparing the first absorbance scan with the second absorbance scan to detect the analyte. The reaction can involve a coenzyme and the analytical technqiue can be directed to the coenzyme. Alternatively, at least two enzymes can be used, the first enzyme generating a first product that is then acted upon by the second enzyme.
Procédé de détection d'un analyte dans un échantillon, faisant appel à la fois à la spécificité d'une réaction enzymatique et au pouvoir séparateur de l'électrophorèse. De façon générale, le procédé consiste à: (1) soumettre un premier prélèvement de l'échantillon à une technique analytique, telle que l'électrophorèse capillaire, qui génère une première sortie, telle qu'un électrophorégramme; (2) soumettre un deuxième prélèvement de l'échantillon à une réaction à catalyse enzymatique convertissant l'analyte en un produit détectable au moyen de la technique analytique; (3) soumettre le deuxième prélèvement à la technique analytique, afin de produire une deuxième sortie; (4) dans le cas de l'électrophorèse, mesurer l'absorbance des première et deuxième sorties (électrophorégrammes) en tant que fonction de la distance de migration le long de l'électrophorégramme à au moins une longueur d'onde à laquelle soit l'analyte, soit le produit est absorbant, de manière à produire une première analyse d'absorbance et une deuxième analyse d'absorbance; (5) comparer la première analyse d'absorbance à la deuxième analyse d'absorbance, afin de détecter l'analyte. La réaction peut impliquer une coenzyme et la technique analytique peut être orientée vers la coenzyme. Dans un autre mode de réalisation, on peut utiliser au moins deux enzymes, la première enzyme générant un premier produit sur lequel la deuxième enzyme exerce alors une action.
Beckman Coulter Inc.
Macrae & Co.
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