G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/543 (2006.01)
Patent
CA 2559803
The present invention is related to analytical platforms and methods performed therewith for generating qualitative and / or quantitative protein expression profiles, in particular differential protein expression profiles, of cell populations comprising: - generating lysates of one or more populations of cells, the lysates comprising a plurality of proteins expressed by the respective cell populations, - providing an essentially planar solid support, - depositing at discrete sites small quantities of the cell lysates, in diluted or undiluted form directly on said solid support or on an adhesion-promoting layer applied on said solid support, thereby creating one or more one- or two- dimensional arrays of discrete measurement areas on said solid support, - applying a number of binding reagents as specific binding partners for the proteins contained in cell lysates in discrete measurement areas and to be detected and, if adequate, one or more detection reagents on said one or more arrays of measurement areas, the binding reagents and the detection reagents being applied sequentially or in a single addition-step, after binding of the detection reagents to the binding reagents, to the one or more arrays of discrete measurement areas for e.g. global analysis of signalling pathways or screening antibody sets/libraries against protein targets for best specificity, selectivity and affinity, and - measuring and recording optical signals emanating from said one or more arrays of discrete measurement areas in a locally resolved manner, wherein said essentially planar solid support is non-porous and an optionally applied adhesion-promoting layer has a thickness of less than 1 ~m.
La présente invention a trait à des plates-formes analytiques et des procédés les utilisant pour la génération qualitative et/ou quantitative de profils d'expression protéinique, notamment des profils d'expression protéinique différentielle, de populations de cellules comprenant : la génération de lysats d'une ou de plusieurs populations de cellules, les lysats comportant une pluralité de protéines exprimées par les populations de cellules respectives ; la mise à disposition d'un support solide sensiblement plan ; le dépôt à des sites distincts de petites quantités de lysats cellulaires, sous forme diluée ou non diluée directement sur ledit support solide ou sur une couche favorisant l'adhésion appliquée sur ledit support solide, créant ainsi une ou des réseaux unidimensionnels ou bidimensionnels de zones distinctes de mesure sur ledit support solide ; l'application d'une pluralité de réactifs de liaison sous forme de partenaires de liaison spécifique pour les protéines contenues dans les lysats cellulaires dans des zones de mesure distinctes à être détectées et, le cas échéant, un ou de réactifs de détection appliqués successivement ou en une seul étape d'addition, suite à la liaison des réactifs de détection aux réactifs de liaison, à l'un ou aux plusieurs réseaux de zones de mesure distinctes pour, par exemple, l'analyse globale des voies de signalisation ou le criblage d'ensembles/de bibliothèques d'anticorps dirigés contre des cibles protéiniques pour une meilleure spécificité, sélectivité et affinité ; et la mesure et l'enregistrement de signaux optiques dérivés dudit un/desdits plusieurs réseau(x) de zones de mesure distinctes dans une résolution locale, dans lequel ledit support sensiblement plan est non poreux et une couche de promotion d'adhésion éventuellement appliquée présente une épaisseur inférieure à 1 µm.
Oroszlan Peter
Pawlak Michael
Schick Eginhard
Bayer Technology Services Gmbh
Fetherstonhaugh & Co.
LandOfFree
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