A - Human Necessities – 61 – K
Patent
A - Human Necessities
61
K
A61K 38/44 (2006.01) A61K 38/16 (2006.01) A61P 43/00 (2006.01) C07K 14/035 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/38 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)
Patent
CA 2337083
The R1 subunit of herpes simplex virus (HSV) ribonucleotide reductase, which is expressed very early after viral reactivation, possesses an N-terminal domain of about 350 amino acids of unknown function. Using an adenovirus (Ad) inducible system we had demonstrated that a complete deletion of this domain produces a cytotoxic protein. We now report that apoptotic death induced by this truncated R1 could be completely prevented by coexpression of the full- length R1. The R1 antiapoptotic activity was further substantiated by showing that expression of this protein at low level can completely block apoptosis induced either by TNF-receptor family triggering in the presence of cycloheximide (CHX) or by Fas-L coexpression with an Ad recombinant. In both cases, the protection was lost when inhibiting tTA function with the tetracycline analog doxycycline shut down R1 expression. A level of R1 of 0.005 % total cell protein was sufficient for half-maximal protection against TNF.alpha.+CHX. By monitoring caspase 8 activation either by immunoblot with an antiserum visualizing the inactive 56-kDa proform and the active 18-kDa species or by an in vitro assay using ETD-AFC as caspase 8 specific fluorescent substrate, we found that the strong activation of caspase 8 induced either by TNF-.alpha.+CHX or Fas-L expression was prevented by the R1 protein. Finally, using an HSV-1 R1 deletion mutant, ICP6.DELTA., we obtained direct evidence for the importance of HSV-R1 in protecting HSV-infected cells against cytokine-induced apoptosis. These results show that, in addition to its reductase function which is essential for viral reactivation, the HSV R1 could contribute to viral propagation by preventing apoptosis induced by the immune system. The N-terminal domain by itself is as anti-apoptotic as the whole RI protein. An anti-apoptotic agent and a composition derived therefrom are described and claimed.
L'invention concerne une sous-unité R1 de la ribonucléotide réductase du herpès simplex virus (HSV) qui est exprimée juste après la réactivation virale, possède un domaine N-terminal d'environ 350 aminoacides de fonction inconnue. Nous avons démontré, à l'aide d'un système pouvant induire l'adénovirus (Ad), qu'une délétion complète de ce domaine produit une protéine cytotoxique. Ainsi, nous avons reporté que l'on pourrait éviter la mort apoptotique induite par cette R1 tronquée par coexpression de la longueur totale R1. L'activité anti-apoptotique R1 était justifiée car il a été démontré que l'expression de cette protéine en faible teneur peut bloquer complètement l'apoptose induite, soit par la famille du récepteur de TNF se manifestant en présence de cycloheximide (CHX), soit par coexpression Fas-L avec un recombinant Ad. Dans les deux cas, la protection n'était plus garantie lors de l'inhibition de la fonction tTA, la doxycycline analogue de la tétracycline immobilisant l'expression R1. Un niveau de R1 comprenant 0,005 % au total de protéine cellulaire s'est avéré suffisant pour assurer une demi-protection contre le TNF.alpha.+CHX. En surveillant l'activation caspase 8, soit par immunoblot avec un antisérum visualisant la proforme 56-kDa inactive et l'espèce 18-kDa active, soit par une épreuve in vitro au moyen d'ETD-AFC en tant que substrat fluorescent spécifique de caspase 8, nous avons découvert que la protéine R1 empêchait une forte activation de la caspase 8 induite par l'expression de TNF-.alpha.+CHX ou par Fas-L. Finalement, au moyen d'un mutant de délétion HSV-R1, ICP6.DELTA., nous avons obtenu la preuve directe de l'importance de HSV-R1 dans la protection des cellules infectées par HSV contre l'apoptose induite par la cytokine. Ces résultats montrent que la HSV R1 pourrait contribuer à la propagation virale, en sus de sa fonction de réduction essentielle pour la réactivation virale, en empêchant l'apoptose induite par le système immunitaire. Le domaine N-terminal est aussi anti-apoptotique que la protéine R1 dans son intégralité. Un agent anti-apoptotique et une composition le renfermant font aussi l'objet de cette invention.
Langelier Yves
Massie Bernard
Centre de Recherche Du Centre Hospitalier de L'universite de Mon
Goudreau Gage Dubuc
LandOfFree
Anti-apoptotic compositions comprising the r1 subunit of... does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Anti-apoptotic compositions comprising the r1 subunit of..., we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Anti-apoptotic compositions comprising the r1 subunit of... will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1674822