Archaeon expression system

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/74 (2006.01)

Patent

CA 2527704

The present invention relates to a sulfolobus expression vector comprising: (a) sulfolobus origin of replication; (b) the genes encoding the structural proteins and the site-specific integrase of SSVI, SSV2 or pSSVx, operatively linked to expression control sequences and a packaging signal; (c) one or more selectable marker gene(s), operatively linked to sulfolobus expression control sequences; and (d) a sulfolobus promoter followed 3' by a restriction enzyme recognition site or a multiple cloning site for insertion of a gene of interest and optionally a 3' regulatory element. Moreover, the present invention relates to a shuttle vector comprising the sequences of the expression vector of the invention and additional sequences for propagation and selection in E. coli, wherein the additional sequences comprise (a) an E.coli on of replication; and (b) a marker for selection in E.coli. Furthermore, the invention relates to host cells transformed with the expression vector as well as to a kit comprising a vector or a host cell of the present invention. Finally, the present application also relates to a method for generating infectious subviral particles.

La présente invention concerne un vecteur d'expression de sulfolubus, qui comprend: a) une origine de réplication de sulfolubus; b) les gènes codant les protéines de structure et l'intégrase spécifique au site de SSVI, SSV2 ou pSSVx, liées de manière fonctionnelle à des séquences régulatrices de l'expression et à un signal d'encapsidation; c) un ou plusieurs gènes marqueurs optionnels liés de manière fonctionnelle à des séquences régulatrices de l'expression de sulfolubus; et d) un promoteur de sulfolubus suivi, à la terminaison 3', par un site de reconnaissance de l'enzyme de restriction ou un site de clonage multiple pour l'insertion d'un gène d'intérêt et, éventuellement, d'un élément régulateur de la terminaison 3'. L'invention concerne également un vecteur navette contenant les séquences du vecteur d'expression et des séquences supplémentaires de propagation et de sélection présentes dans E. coli. Ces séquences supplémentaires comprennent: a) une origine de réplication de E.coli; et b) un marqueur de sélection présent dans E. coli. L'invention concerne en outre des cellules hôtes transformées à l'aide du vecteur d'expression, ainsi qu'une trousse comprenant un vecteur ou une cellule hôte de l'invention. L'invention concerne enfin une méthode de production de particules sous-virales infectieuses.

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