Assay and reagent kit for the quantitative in vitro...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/02 (2006.01) C12Q 1/34 (2006.01) C12Q 1/44 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2198731

Disclosed herein are a diagnostic assay method and reagent kits for the quantitative in vitro determination of the activity in biological specimens of MDR proteins causing multi-drug resistance in tumors. The method of the invention is based on the measurement of the accumulation rate of a compound within the cells of the specimen (advantageously by fluorescence measurement) which compound is not a good substrate of the MDR protein present in the sample, not cell permeable and is being formed within the cells, by enzymes generally present in the cells, from a compound which is a good substrate of said MDR protein, cell permeable and is added to the specimen in vitro. Based on the method of the invention, it is possible to calculate an MDR activity factor (MAF) value that is, within the diagnostically relevant range, characteristic of the MDR activity, i.e. to the multi-drug resistance level of the specimen.

On décrit un procédé de titrage diagnostique et des trousses de réactifs permettant de quantifier in vitro dans des spécimens biologiques l'activité de protéines MDR (responsables de la résistance multiple aux anticancéreux). Ce procédé repose sur la mesure du taux d'accumulation d'un composé dans des cellules d'un spécimen (de préférence par mesure de fluorescence). Ce composé ne représente pas un bon substrat pour la protéine MDR présente dans l'échantillon, ne pénètre pas dans les cellules et se forme dans ces cellules, grâce à des enzymes qui y sont généralement présentes, à partir d'un composé qui est un bon substrat pour la protéine MDR, pénètre dans les cellules, et est ajouté au spécimen in vitro. Selon ce procédé, on peut calculer une valeur d'un facteur d'activité MDR caractéristique de l'activité MDR, dans une fourchette appropriée du point de vue diagnostique, et donc du niveau de résistance multiple aux anticancéreux du spécimen.

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