C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/48 (2006.01)
Patent
CA 2370469
The invention provides an assay for detecting phospho-N-acetylmuramyl- pentapeptide translocase enzyme activity, which comprises the steps of: (1) incubating a reaction mixture comprising, in aqueous medium, N-succinimidyl [2,3-3H]propionate substituted UDP-MurNAc-pentapeptide, N-succinimidyl propionate substituted UDP-MurNAc-pentapeptide (non-radioactive), a source of divalent metal ions, a source of undecaprenyl phosphate, a source of translocase enzyme and a detergent, under conditions suitable for enzyme activity to occur; (2) acidification of the reaction mixture with a suitable buffer comprising a quaternary ammonium salt at pH ~4.2 to stop the enzyme reaction of step (1); and (3) extraction of any undecaprenol-pyrophosphate- [2,3-3H]propionate-N-acetylmuramyl-pentapeptide product formed and measuring radioactivity using a scintillation counter; and also a kit for use therein.
L'invention concerne un test de détection de l'activité de l'enzyme phospho-n-acétylmuramyl-pentapeptide translocase consistant (1) à incuber un mélange réactionnel contenant, dans un milieu aqueux, un UDP-MurNAc-pentapeptide à N-succinimidyl [2,3-?3¿H]propionate substitué, UDP-MurNAc-pentapeptide à N-succinimidyl propionate substitué (non radioactif), une source d'ions métalliques divalents, une source d'un phosphate de décaprényle, une source d'enzyme translocase et un détergent, dans des conditions dans lesquelles l'activité de l'enzyme peut avoir lieu; (2) à acidifier le mélange réactionnel avec un tampon convenable comprenant un sel d'ammonium quaternaire à un pH d'environ 4,2 pour arrêter la réaction de l'enzyme se produisant sous (1), puis (3) à extraire tout produit d'undécaprénol-pyrophosphate-[2,3-?3¿H]propionate-N-acétylmuramylpentapeptide obtenu et à mesurer la radioactivité à l'aide d'un compteur à scintillations. L'invention concerne également un kit à utiliser dans le test.
Das Kaveri
Ramachandran Janakiraman
Astrazeneca Ab
Fetherstonhaugh & Co.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1722454