G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/53 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01) C07K 16/18 (2006.01) C07K 16/28 (2006.01)
Patent
CA 2278577
An assay method is disclosed which makes it possible to determine the presence of a diseased related conformation of a protein (e.g., PrPSc or the .beta.- sheet form of .beta.A4) in a sample. A sample is divided into two portions and the first portion is cross-linked to a first solid support and then contacted with a labeled antibody which binds to a non-disease form of the protein with a higher degree of affinity (e.g., 4 to 30 fold higher) than to the disease form of the protein to change conformation to a form with a higher binding affinity for the labeled antibody. The treated second portion is then bound to a second solid support and contacted with labeled antibody. The level of labeled antibody binding to a protein in the first and second portions is determined and the amounts measured in each are compared. The difference between the two measurements is an indication of whether the disease related conformation of the protein was present in the sample. The method can also determine the concentration of the disease related conformation and the particular strain present.
Cette invention se rapporte à un procédé de dosage qui permet de déceler la présence d'une structure protéique associée à une maladie (par exemple, PrP?Sc¿ ou la forme en feuillet-bêta de .beta.A4) dans un échantillon. On divise l'échantillon en deux parties et l'on provoque la réticulation de la première partie avec un premier support solide, puis on la met en contact avec un anticorps marqué qui se lie à une forme protéique non associée à la maladie, avec un degré d'affinité supérieur (par ex., 4 à 30 fois supérieur) pour cette forme que pour la forme protéique associée à la maladie. On traite la seconde partie de manière à provoquer le changement de structure de toute forme protéique associée à la maladie en vue de l'obtention d'une forme possédant une affinité de liaison supérieure pour l'anticorps marqué. Puis on fait en sorte que la seconde partie traitée se lie à un second support solide et entre en contact avec l'anticorps marqué. On évalue le degré de liaison de l'anticorps marqué à une protéine dans les première et seconde parties et l'on compare les mesures associées à chacune de ces parties. La différence entre les deux mesures est une indication de la présence de la structure protéique associée à la maladie dans l'échantillon. Ce procédé permet également d'évaluer la concentration de la structure protéique associée à la maladie ainsi que la souche particulière de protéine.
Prusiner Stanley B.
Safar Jiri G.
Fetherstonhaugh & Co.
The Regents Of The University Of California
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1871141