C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/12 (2006.01) C07D 235/18 (2006.01) C07D 401/04 (2006.01) C07D 403/12 (2006.01) C07D 405/04 (2006.01) C07D 405/14 (2006.01) C07D 409/04 (2006.01) C07D 417/14 (2006.01) C07D 471/04 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01) G01N 33/573 (2006.01)
Patent
CA 2439176
The present invention provides a novel method for the identification of inhibitors of HCV NS5B polymerase that uses an HCV NS5B RNA-dependent RNA polymerase having a higher Km than the full length native NS5B polymerase to ensure identification of inhibitors of HCV polymerase primer-template binding, including moderately inhibitory compounds. The method includes providing a decreased-affinity HCV NS5B polymerase, an appropriate primer-template, and a plurality of appropriate ribonucleotide triphosphates, incubating the HCV NS5B polymerase with the primer-template in the presence and absence of a potential inhibitor, measuring the presence of any polymerase products formed in the presence and absence of the potential inhibitor; and comparing the amount of the polymerase products formed in the presence and absence of the potential inhibitor; wherein a decrease in the amount of the polymerase products formed in the presence of the potential inhibitor compared to the amount of polymerase products formed in the absence of the potential inhibitor is indicative of a potential primer-template binding inhibitor of HCV NS5B RNA dependent RNA polymerase.
La présente invention concerne une nouvelle méthode d'identification d'inhibiteurs de la polymérase VHC NS5B utilisant une ARN polymérase dépendante de l'ARN VHC NS5B pourvue d'une Km supérieure à celle de la polymérase NS5B native entière, de manière à garantir une identification d'inhibiteurs la liaison amorce-matrice de la polymérase VHC, notamment de composés modérément inhibiteurs. La méthode consiste à engendrer une polymérase VHC NS5B à affinité diminuée, une liaison amorce-matrice appropriée, et une pluralité de ribonucléotides triphosphates adéquats, à faire incuber la polymérase VHC NS5B avec la liaison amorce-matrice en présence et en l'absence d'un inhibiteur potentiel, à mesurer la présence de tous les produits de la polymérase formés en présence et en l'absence de l'inhibiteur potentiel, et à comparer la quantité des produits de la polymérase formés en présence et en l'absence de l'inhibiteur potentiel. Une diminution de la quantité des produits de la polymérase formés en présence de l'inhibiteur potentiel comparée à la quantité de produits de la polymérase formés en l'absence de l'inhibiteur potentiel est indicatrice d'un inhibiteur de la liaison amorce-matrice potentiel de la polymérase d'ARN dépendante de l'ARN VHC NS5B.
Kukolj George
Mckercher Ginette
Boehringer Ingelheim (canada) Ltd.
Looper Ywe J.
LandOfFree
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