C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12Q 1/533 (2006.01)
Patent
CA 2586534
Provided are methods, such as high throughput methods, of assessing or measuring the ability of an enzyme to modify the topology (e.g. supercoil topology) of a target nucleic acid, the methods comprising the steps of: (a) providing a solid support to which a capture nucleic acid is or may be immobilised, which capture nucleic acid is capable of binding the target nucleic acid in a manner that is proportional to the supercoil topology of said target nucleic acid (e.g. by triplex formation); (b) incubating a test mixture comprising (i) the enzyme, (ii) the target nucleic acid, (iii) capture nucleic acid, in the presence of (iv) said solid support, such that supercoiled target nucleic acid bound by the capture nucleic acid is immobilised to the solid support, (c) determining the amount of target nucleic acid bound by said capture nucleic acid in step (b) e.g. by use of a detectable label. The method may be used to screen for modulators of the enzyme activity.
L'invention concerne des procédés, par exemple à rendement élevé, pour analyser ou mesurer la capacité d'un enzyme à modifier la topologie (par exemple une topologie supra spiralée) d'un acide nucléique cible, les procédés comprenant les phases suivantes : (a) fourniture d'un support solide sur lequel un acide nucléique d'acquisition est ou peut être immobilisé, ledit acide nucléique d'acquisition étant capable de lier l'acide nucléique cible d'une manière proportionnelle à la topologie supra spiralée dudit acide nucléique cible (par exemple par une formation triplex) ; (b) incubation d'un mélange de test englobant (i) l'enzyme, (ii) l'acide nucléique cible, (iii) l'acide nucléique d'acquisition, en présence dudit (iv) support solide, pour que l'acide nucléique cible supra spiralé lié par l'acide nucléique d'acquisition soit immobilisé sur le support solide, (c) détermination de la quantité de l'acide nucléique cible liée par ledit acide nucléique d'acquisition dans la phase (b) par exemple à l'aide d'un label détectable. Le procédé peut servir à cribler les modulateurs de l'activité enzymatique.
Fetherstonhaugh & Co.
Plant Bioscience Limited
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1909086