Assay for proline iminopeptidase and other hydrolytic...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

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C12Q 1/34 (2006.01) C12M 1/40 (2006.01) C12Q 1/04 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01) G01N 33/52 (2006.01)

Patent

CA 2202993

The presence of an enzymatically active hydrolase in a fluid sample is detected by contacting the sample with a solid-phase conjugate which is susceptible to cleavage by the hydrolase, and simultaneously or shortly thereafter, contacting the sample with an indicator which undergoes a detectable change upon the action of a reporter group. The reporter group is part of the conjugate and is liberated from it either partly or entirely by the action of the hydrolase. The indicator is susceptible to action by the reporter group only upon decoupling of the reporter group from the remainder of the conjugate, the decoupling occuring either in part or entirely upon action of the hydrolase. Also provided by this invention are various forms of a dry, self-contained test device which contains the conjugate described above plus the indicator and all other reagents and components necessary to achieve a detectable indication of the presence or absence of a catalytically active hydrolase. Preferred embodiments of the device also contain positive and negative controls.

Pour détecter la présence d'une hydrolase ayant une activité enzymatique dans un échantillon de fluide, on met l'échantillon en contact avec un système conjugué en phase solide qui est susceptible d'être scindé par l'hydrolase. En même temps ou un court moment après, on met l'échantillon en contact avec un indicateur qui subit un changement visible consécutivement à l'action d'un groupe reporteur. Le groupe reporteur fait partie du système conjugué et il est libéré de celui-ci soit partiellement, soit totalement par l'action de l'hydrolase. L'indicateur est sensible à l'action du groupe reporteur uniquement après découplage du groupe reporteur du restant du système conjugué, le découplage se faisant soit en partie soit en totalité consécutivement à l'action de l'hydrolase. Cette invention concerne également différentes formes de dispositifs secs complets comprenant le système conjugué en question et en plus l'indicateur et tous les autres réactifs et ingrédients nécessaires pour mettre en évidence la présence ou l'absence d'une hydrolase ayant une activité catalytique. Dans sa forme d'exécution préférée, on prévoit avec le dispositif un échantillon de référence négatif et un échantillon de référence positif.

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