C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/28 (2006.01) G01N 33/52 (2006.01) G01N 33/533 (2006.01)
Patent
CA 2251803
Chemiluminescent detection of molecules of synthetic or natural origin such as proteins and nucleic acids (DNA and RNA), as well as other biologic molecules, is increasingly replacing radioactive detection as the method of choice where sensitivity is critical. In such assays, luminescence is customarily achieved by the oxidation of a luminol or isoluminol substrate in the presence of an oxidizing agent such as hydrogen peroxide or hydrogen peroxide source, such as perborate, and a peroxidase catalyst such as horseradish peroxidase. To obtain useful levels of luminescence (e.g., detectable levels) by customary techniques, a luminescent enhancer is also present during oxidation. It has been found in the practice of the present invention that azine enhancers have contained an impurity which reduces the properties of the chemiluminescent assay working solutions. The present invention describes a working solution, a process of using the working solution, and kits containing solutions which can be mixed to form the working solutions comprising a solution which is useful for the chemiluminescent assay of peroxidase activity comprising: a) at least one chemiluminescent cyclic diacylhydrazide, b) at least one azine enhancer, and c) at least one oxidizing agent wherein said azine enhancer comprises less than 0.005 parts mole/mole total basis of azine compounds having a hydrogen atom bonded to a nitrogen atom of the azine ring. It has generally been found that this hydrogen containing azine is a poisoning agent for the performance of the azine enhancer.
La détection par chimiluminescence de molécules d'origine synthétique ou naturelle, telles que des protéines et des acides nucléiques (ADN et ARN), ainsi que d'autres molécules biologiques, remplace de plus en plus la détection par radioactivité en tant que méthode de choix dans laquelle la sensibilité est critique. Dans ce type de méthode, on obtient habituellement la luminescence par oxydation d'un substrat de luminol ou d'isoluminol en présence d'un agent oxydant, tel que peroxyde d'hydrogène ou qu'une source de peroxyde d'hydrogène, telle que perborate, ainsi que d'un catalyseur de peroxydase, telle qu'une peroxydase de raifort. Un amplificateur de luminescence est également présent pendant l'oxydation, afin d'obtenir des niveaux utiles de luminescence (par exemple, des niveaux détectables) au moyen de techniques classiques. On a découvert dans la mise en application de cette invention que les amplificateurs d'azine contiennent une impureté diminuant les propriétés des solutions de travail utilisées dans les méthodes de détection par chimiluminescence. L'invention concerne une solution de travail, un procédé d'utilisation de cette solution de travail, ainsi que des trousses contenant des solutions pouvant être mélangées afin d'obtenir les solutions de travail, y compris une solution utile dans la méthode de détection par chimiluminescence de l'activité de peroxydase et comprenant: (a) au moins un diacylhydrazide cyclique chimiluminescent, (b) au moins un amplificateur d'azine, (c) au moins un agent oxydant, ledit amplificateur d'azine contenant une quantité inférieure à 0,005 parties molaires sur la base totale molaire de composés d'azine dans lesquels un atome d'hydrogène est fixé à un atome d'azote de la chaîne d'azine. On a découvert que cet azine contenant de l'hydrogène est un agent toxique pour l'efficacité de l'amplificateur d'azine.
Davis Paul D.
Feather-Henigan Kelli
Hines Kimberly
Gowling Lafleur Henderson Llp
Pierce Chemical Company
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1837362