Assay to detect replication competent viruses

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/70 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 7/01 (2006.01) C12N 7/02 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/861 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) C12Q 1/06 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2488778

A biological assay for detecting a non-selective replication competent virus (RCV) in a preparation of selectively-replicating virus. The method comprises - passaging the virus preparation at least once on cells that differentially amplify the selectively-replicating virus versus a replication competent virus and further analyzing the virus preparation, thereby detecting the presence of a replication competent virus. The further analysis of the virus preparation includes one or more of the following: detecting increased cytopathic effect; detecting increased virus production; detecting increased potency to kill normal cells; detecting an altered restriction digest pattern; detecting an altered viral genome sequence; detecting anticipated recombinants with PCR amplification; and detecting acute hepatotoxicity in an animal administered the virus preparation. In one embodiment, the assay detects replication competent adenoviruses in a preparation of an oncolytic adenovirus.

Cette invention concerne une analyse biologique permettant de détecter un virus apte à la réplication non sélective dans une préparation de virus à réplication sélective (RCV). Le procédé consiste à faire passer la préparation virale au moins une fois sur des cellules qui amplifient de manière différentielle le virus à réplication sélective par comparaison avec un virus apte à la réplication, puis à poursuivre l'analyse de la préparation virale pour y détecter la présence d'un virus apte à la réplication. La poursuite de l'analyse virale comprend une ou plusieurs des opérations suivantes : détection d'un effet cytophathique accru, détection d'une production virale, détection d'un pouvoir de destruction accru de cellules normales, détection d'un schéma de digestion de restriction altéré, détection d'une séquence génomique altérée, détection de recombinants attendus avec amplification de la réaction en chaîne de la polymérase et détection d'une hépato-toxicité aiguë chez un animal auquel on a administré la préparation virale. Dans un mode de réalisation, l'analyse permet de détecter des adénovirus aptes à la réplication dans une préparation d'adénovirus oncolytique.

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