Assaying apparatus, kit, and method for lipids and...

G - Physics – 01 – N

Patent

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G01N 33/92 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) G01N 21/00 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/573 (2006.01) G01N 33/574 (2006.01)

Patent

CA 2468275

A lipid assay method, kit, and apparatus involving exposure of a protein, having a lipid recognition motif that interacts with a target lipid and a competing lipid, to a solution containing the competing lipid, and determining whether the target lipid is present in the solution. The target lipid has a stronger affinity to the lipid recognition motif than does the competing lipid. The lipid recognition motif is preferably a pleckstrin homology (PH) domain, with the target lipid being a phosphoinositide. The assay determines activity of a lipid kinase, the target lipid being a phosphorylation product of a reaction between the lipid kinase and a substrate lipid. The assay can be a cancer screening method for detection of cancer cells, where detection of certain levels of a PI(3,4,5)P3 target lipid is an indicator of a cancer cell.

La présente invention concerne un procédé, un nécessaire et un appareil de titrage biologique des lipides. En l'occurrence, on prend une protéine comportant un motif de reconnaissance des lipides qui est en interaction avec un lipide cible et un lipide en compétition, on expose cette protéine à une solution contenant le lipide en compétition, et on détermine si le lipide cible est présent dans la solution. Le lipide cible présente pour le motif de reconnaissance des lipides une affinité supérieure à celle du lipide en compétition. Le motif de reconnaissance des lipides est de préférence un domaine PH d'homologie des pleckstrines, le lipide cible étant de préférence une phosphoïnositure. Le titrage biologique détermine l'activité d'un lipide kinase, le lipide cible étant un produit de phosphorylation d'une réaction entre le lipide kinase et un lipide substrat. Le titrage biologique peut être un procédé de recherche systématique du cancer par détection de cellules cancéreuses, al détection de certains niveaux d'un lipide cible PI(3,4,5)P¿3? étant un indicateur de cellule cancéreuse.

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