Assays for protease enzyme activity

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/37 (2006.01) C12Q 1/00 (2006.01)

Patent

CA 2533309

Bioconjugates, kits and assays for detecting the activity of protease enzymes such as .beta.-secretase and caspase enzymes are described. The bioconjugates include a tether having a segment capable of recognizing and interacting with (e.g., being cleaved by) the enzyme, a fluorescer including a plurality of fluorescent species conjugated to a first location on the tether, and a quencher conjugated to a second location on the tether. The segment capable of recognizing and interacting with the protease enzyme (e.g., .beta.-secretase or caspace) is located between the first and second locations on the tether. The plurality of fluorescent species are associated with one another such that the quencher is capable of amplified super-quenching of the fluorescer. The assay is suitable for screening potential drugs for their efficiency in inhibiting the activity of protease enzymes such as .beta.-secretase in a high throughput format where the potential drugs are evaluated.

La présente invention concerne des bioconjgués, des nécessaires et des essais de détection de l'activité de protéases telles que la .beta.-secrétase et la caspase. Ces bioconjugués portent une attache comportant un segment capable de reconnaître l'enzyme et d'entrer en interaction avec elle, par exemple par clivage par elle. L'attache porte également un agent de fluorescence incluant une pluralité d'espèces fluorescentes conjuguées à un premier emplacement de l'attache, et extincteur de luminescence conjugué à un deuxième emplacement de l'attache. Le segment capable de reconnaître la protéase, par exemple une .beta.-secrétase ou une caspase, et d'entrer en interaction avec elle, est situé entre le premier et le deuxième emplacement de l'attache. Les espèces fluorescentes sont associées entre elles de façon que l'extincteur de luminescence soit capable d'une super-extinction amplifiée de l'agent de fluorescence. Cet essai convient particulièrement pour rechercher systématiquement l'efficacité de médicaments potentiels à inhiber l'activité d'enzymes telles que la .beta.-secrétase dans un format élevé de débit à l'occasion de l'évaluation de médicaments potentiels.

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