Asymmetric pcr with nuclease-free polymerase or...

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C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)

Patent

CA 2462505

The invention provides methods for performing combined asymmetric amplification (e.g. asymmetric PCR amplification) and detection of nucleic acid targets using molecular beacons to detect the products. Methods using a polymerase having reduced or eliminated 5' to 3' nuclease activity are provided, as are methods using nuclease-resistant molecular beacons. Asymmetric amplifications using nuclease-free polymerase or nucleease- resistant molecular beacons provide dramatic improvements in signal intensity detected as a result of molecular beacon binding to a target nucleic acid, e.g., during asymmetric PCR. Attendant compositions, systems, devices and kits are also features of the invention.

L'invention concerne des méthodes destinées à réaliser une amplification asymétrique combinée (telle qu'une amplification PCR asymétrique) et une détection de cibles d'acides nucléiques au moyen de balises moléculaires en vue de détecter des produits. Elle concerne des méthodes utilisant une polymérase présentant une activité nucléasique de 5' à 3' réduite ou nulle, ainsi que des méthodes utilisant des balises moléculaires résistant aux nucléases. Les amplifications asymétriques utilisant une polymérase non nucléasique ou des balises moléculaires résistant aux nucléases permettent d'améliorer considérablement l'intensité de signal détectée à la suite d'une liaison des balises moléculaires à un acide nucléique cible, notamment pendant une PCR asymétrique. L'invention concerne également des compositions, des systèmes, des dispositifs et des trousses associés.

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