G - Physics – 02 – B
Patent
G - Physics
02
B
G02B 7/36 (2006.01) G01N 15/14 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G02B 21/00 (2006.01) G02B 21/24 (2006.01) G02B 21/26 (2006.01)
Patent
CA 2192986
Reliable autofocus is required to obtain accurate measurements of fluorescent stained cellular components from a system capable of scanning multiple microscope fields. Autofocus could be performed directly with fluorescence images, but due to photobleaching and destructive fluorescence by-products, it is best to minimize fluorescence exposure for photosensitive specimens and live cells. This exposure problem could be completely avoided by using phase-contrast microscopy, implemented through the same optics as fluorescence microscopy. Functions for both phase-contrast and fluorescence autofocus were evaluated using the present invention and the suitability of phase-contrast autofocus for fluorescence microscopy was determined. The present autofocus system for scanning microscopy can be performed at least as fast as 0.25 s/field without loss of precision. The speed of autofocus can be further increased by a volume image which is obtained by observing an image object at each image plane of a plurality of image planes, where each image plane is vertically displaced with respect to each other image plane. An electronic image representation is obtained at each image plane. The image planes are scanned over the image object and the images are aligned timewise in a buffer. The buffer holds a volume image comprising images at the image planes, aligned by the buffer. The image plane having the but focus is selected and a microscope objective is automatically positioned at the selected plane.
Une focalisation automatique fiable est nécessaire pour l'obtention de mesures précises de composants cellulaires colorés fluorescents à partir d'un système capable de balayer de multiples champs de microscope. La focalisation automatique pourrait s'effectuer directement avec des images de fluorescence, mais en raison des sous-produits de photoblanchiment et de fluorescence destructifs, il est préférable de réduire au minimum l'exposition à la fluorescence pour les échantillons et les cellules vivantes photosensibles. On pourrait supprimer totalement ce problème d'exposition en utilisant la microscopie à contraste de phase mise en oeuvre avec les mêmes équipements optiques que dans la microscopie à fluorescence. On a évalué les fonctions de la focalisation automatique à contraste de phase et à fluorescence avec le système selon l'invention, puis la compatibilité de la focalisation à contraste de phase pour la microscopie à fluorescence. Le système de focalisation automatique selon l'invention prévu pour la microscopie à balayage peut être utilisé à des vitesses aussi élevées que 0,25 s/champ sans perte de précision. La vitesse de la focalisation automatique peut être encore augmentée par une image de volume obtenue par l'observation d'un objet d'image à chaque plan d'image d'une pluralité de plans d'image, lesquels sont déplacés verticalement les uns par rapport aux autres. Une représentation d'image électronique est obtenue à chaque plan d'image. Les plans d'image sont balayés sur l'objet d'image, les images étant ensuite alignées de manière temporelle dans un tampon qui comprend une image de volume contenant des images au niveau des plans d'image alignés par le tampon. Le plan d'image présentant la meilleure focalisation est sélectionné et un objectif de microscope est positionné automatiquement au niveau du plan sélectionné.
Oyen Wiggs Green & Mutala Llp
Price Jeffrey H.
Q3dm Llc
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1517683