C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) B01L 7/00 (2006.01) C12M 1/34 (2006.01) C12M 1/40 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G01N 21/76 (2006.01) G01N 27/447 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01)
Patent
CA 2174779
A method is disclosed for automated multiplex sequencing of DNA with an integrated system. This system comprises a hybridization chamber for a membrane containing size-fractionated multiplex sequencing reaction products, apparatus for fluid delivery to the chamber, imaging apparatus for image recording of fluorescence emanating from the membrane, and programmable controller apparatus for controlling operation of the system. The multiplex reaction products are hybridized with a probe, then an enzyme is bound to the probe, and a fluorogenic substrate is introduced into the chamber by the fluid delivery apparatus. The enzyme converts the fluorogenic substrate into a fluorescent product which, when illuminated in the chamber, produces a fluorescence pattern of hybridization. The pattern of hybridization is imaged by a CCD camera to obtain a series of digital signals, which are converted by the controller apparatus into a nucleotide sequence. The apparatus can also be used for colony and plaque hybridization, and Southern, Northern, and Western blots.
L'invention concerne un procédé de séquençage multiplex automatisé de l'ADN au moyen d'un système intégré. Ce système comporte une chambre d'hybridation conçue pour une membrane contenant des produits de réaction de séquençage multiplex fractionnés, un appareil d'alimentation en fluide de ladite chambre, un appareil d'imagerie conçu pour enregistrer en image la fluorescence émanant de la membrane, ainsi qu'un organe de commande programmable permettant de gérer le fonctionnement du système. Les produits de réaction multiplex sont hybridés avec une sonde, après quoi une enzyme est fixée sur cette dernière, et un substrat fluorogène est introduit dans la chambre par l'appareil d'alimentation en fluide. L'enzyme convertit le substrat fluorogène en un produit fluorescent qui, lorsqu'il est illuminé dans la chambre, produit un motif de fluorescence d'hybridation. Ce motif d'hybridation est mis en images par une caméra à CCD, ce qui permet d'obtenir une série de signaux numériques qui sont convertis par l'organe de commande en une séquence nucléotidique. Ledit appareil peut également être utilisé pour l'hydridation sur colonie et sur plaque, ainsi que pour les analyses Southern blot, Northern blot et Western blot.
Cherry Joshua L.
Di Sera Leonard J.
Dunn Diane M.
Ferguson F. Mark
Gesteland Raymond F.
Smart & Biggar
University Of Utah (the)
LandOfFree
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