Automated methods of detecting receptor activity

Details Automated methods of detecting receptor activity Automated methods of detecting receptor activity

G - Physics

01

N

G01N 33/53 (2006.01) C12N 1/20 (2006.01) C12N 5/00 (2006.01) C12N 5/02 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01) C12P 21/04 (2006.01) C12P 21/06 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01) G01N 33/567 (2006.01)

Patent

CA 2440683

Methods of detecting G protein-coupled receptor (GPCR) activity in vitro and in vivo are provided. In one embodiment, the method includes providing at least one cell that expresses a GPCR and a plurality of conjugated proteins. Each of the plurality of conjugated proteins is formed by conjugating an arrestin protein and a detectable molecule. The plurality of conjugated proteins are substantially evenly distributed in the cytoplasm of the at least one cell. A first image of the at least one cell is obtained by detecting an amount of energy emitted from the detectable molecules and storing a value relative to the amount of energy. The at least one cell is treated with an agonist. A second image of the at least one cell is obtained. The first image and the second image are compared to detect the localization of at least some of the plurality of conjugated proteins at endocytic vesicles and/or endosomes.

Cette invention concerne des procédés de détection <i>in vitro</i> and <i>in vivo</i> d'activité pour un récepteur couplé aux protéines G (GPCR). Dans un mode de réalisation, le procédé consiste à utiliser au moins une cellule qui exprime un GPCR et une pluralité de protéines conjuguées. Chacune de ces protéines conjuguées est formée par la conjugaison d'une protéine d'arrestine et d'une molécule détectable. Ces particules conjuguées sont pour l'essentiel uniformément réparties dans le cytoplasme de ladite cellule. On obtient une première image de cette cellule en détectant une quantité d'énergie dégagée par les molécules détectables et en stockant la valeur correspondant à cette quantité d'énergie. Ladite cellule est traitée au moyen d'un agoniste. On réalise une seconde image de cette cellule. La comparaison entre la première et la seconde image permet de détecter l'emplacement d'au moins certaines de la pluralité de protéines conjuguées au niveau de vésicule endocytiques et/ou d'endosomes.

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