C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/34 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01) C12Q 1/42 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/542 (2006.01) G01N 33/573 (2006.01)
Patent
CA 2456590
The invention is a method for detecting a reaction product which signals the presence of a reaction product inducer such as an enzyme. The method enables the recognition of epitopes that form the basis of a detection strategy without the need for specific antibodies to the epitope. In the method, a directly or indirectly labeled modular domain and a biotinylated form of the cognate peptide ligand are used as the basis for a measurable interaction. The peptide ligand can be masked by modifications through, for example, phosphorylation of the Ser or Thr residue, or extension of the amino acid sequence beyond the C-terminal Val. Because the masked residues are critical to binding of the labeled modular domain, masking of at least one of the residues prevents binding. Upon treatment of the masked residue by the appropriate enzyme, (e.g., treatment of the phosphorylated residue with a phosphatase enzyme, or treatment of the extended residue with a protease enzyme, the peptide is converted to the original unmasked ligand that is capable of binding to the labeled modular domain and forming a measurable complex.
L'invention concerne un procédé de détection d'un produit réactionnel signalant la présence d'un inducteur de produit réactionnel, tel qu'une enzyme. Le procédé permet de reconnaître les épitopes formant la base d'une stratégie de détection sans avoir à repérer les anticorps spécifiques à l'épitope. Selon ce procédé, un domaine modulaire marqué directement ou indirectement ainsi qu'une forme biotinylée du ligand peptidique de cognate sont utilisés comme base pour une interaction mesurable. Le ligand peptidique peut être masqué par modifications à travers, par exemple, la phosphorylation d'un résidu SER ou THR, ou par extension de la séquence d'acides aminés au-delà de VAL à terminaison C. Comme les résidus masqués sont décisifs en terme de liaison du domaine modulaire marqué, le masquage d'au moins un des résidus évite la liaison. Après le traitement du résidu masqué par l'enzyme adéquate, (p.ex. traitement d'un résidu phosphorylé avec une enzyme phosphatase ou traitement d'un résidu étendu avec une enzyme protéase), le peptide est transformé en un ligand non masqué original capable de se lier au domaine modulaire marqué et de former un complexe mesurable.
Ferrer Marc
Hamilton Aaron C.
Inglese James
Merck & Co. Inc.
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1837480