C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 7/50 (2006.01)
Patent
CA 2761471
The invention relates to novels ways of introducing an affinity tag into a protein of interest. Provided is an enzy-matic method for providing a proteinaceous substance comprising a polypeptide of interest and a cyclic affinity tag, comprising the steps of: (a) providing at least one precursor proteinaceous substance, the precursor comprising said protein of interest and at least one motif of the general formula X1-Tag-X2, wherein X1 and X2 represent amino acids whose side chains can be linked enzymatically by a covalent bond; Tag is a short amino acid sequence capable of binding to a binding partner of the tag when cy-clized; (b) contacting said precursor with at least one enzyme capable of forming a covalent bond between X1 and X2, thereby in-troducing an intramolecular ring structure comprising the Tag sequence; and (c) isolating the resulting cyclized proteinaceous substance. Also provided are proteinaceous substances obtainable thereby and the use thereof, for instance for preparing a peptide li-brary.
L'invention concerne de nouvelles voies d'introduction d'un marqueur d'affinité dans une protéine d'intérêt. L'invention concerne un procédé enzymatique de préparation d'une substance protéique comprenant un polypeptide d'intérêt et un marqueur d'affinité cyclique, qui comprend les étapes suivantes : (a) la préparation d'au moins une substance protéique précurseur, le précurseur comprenant ladite protéine d'intérêt et au moins un motif de formule générale X1-Tag-X2, dans laquelle X1 et X2 représentent des acides aminés dont les chaînes latérales peuvent être reliées enzymatiquement par une liaison covalente ; Tag est une séquence d'acides aminés courte capable de se lier à un partenaire de liaison du marqueur lors d'une cyclisation ; (b) la mise en contact dudit précurseur avec au moins une enzyme capable de former une liaison covalente entre X1 et X2, introduisant ainsi une structure cyclique intramoléculaire qui comprend la séquence Tag ; et (c) l'isolement de la substance protéique cyclisée résultante. L'invention concerne également des substances protéiques qui peuvent être obtenues ainsi et leur utilisation, par exemple pour la préparation d'une bibliothèque de peptides.
Bosma Tjibbe
Kuipers Anneke
Moll Gert Nikolaas
Rink Rick
Applied Nanosystems B.v.
Fetherstonhaugh & Co.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1666080