Bulk cryopreservation of biological materials and uses for...

A - Human Necessities – 01 – N

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A01N 1/02 (2006.01)

Patent

CA 2209952

A method for bulk cryopreservation of biological material includes the steps of providing a flexible container, such as a freezer bag, containing biological material that is treated with cryoprotectant and freezing the biological material to below -100 °C and preferably below -196 °C for deep freeze long-term storage. In the preferred embodiment, the bag is placed in a holder that maintains the cross-sectional area of the bag essentially constant and small enough (e.g, about 5mm width) to facilitate uniform heat transfer to and from all regions of the bag. This facilitates uniform nucleation of the biological material after supercooling which enables controlled and uniform slow cooling through from about -7.5 °C to a temperature in the range of about -40 °C to -80 °C, thereby maintaining the viability of the cells. The present invention also provides for encapsulation of the biological material before cryopreserving, whereby the material is encapsulated in a gel, such as alginate. Further provided are methods for stabilizing the material for shipment, storage in culture, and transplantation through the use of encapsulation. Encapsulation of the material also improves or help retain its viability over unencapsulated material.

Méthode pour la cryoconservation de matières biologiques comprenant les étapes suivantes : fournir un contenant flexible, comme un sac de congélation, pour recevoir la matière biologique qui est traitée à l'aide d'un agent de cryoconservation et congeler la matière biologique à une température inférieure à -100 degrés C et, préférablement, à -196 degrés C, en vue d'une conservation à très basse température à long terme. Dans l'application de choix, le sac est placé dans un porte-sac qui garde la surface de section transversale du sac essentiellement constante et suffisamment petite (p. ex. environ 5 mm de largeur) pour faciliter un transfert bidirectionnel de chaleur uniforme dans toutes les parties du sac. On facilite ainsi la nucléation uniforme de la matière biologique après surfusion, ce qui permet un refroidissement lent contrôlé et uniforme entre environ -7,5 degrés C et une température se situant dans une plage d'environ -40 degrés C à -80 degrés C, assurant ainsi la viabilité des cellules. La présente invention fournit également une méthode d'encapsulation de la matière biologique avant cryoconservation, méthode qui se caractérise par le fait que la matière est encapsulée dans un gel, comme l'alginate. Sont également décrites des méthodes fondées sur l'utilisation de l'encapsulation pour stabiliser la matière en vue de l'expédition, de l'entreposage en culture et du repiquage. L'encapsulation de la matière a aussi pour effet d'améliorer la viabilité, ou d'aider à la conserver, si l'on compare avec la matière non encapsulée.

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