Calibrated rpma assay

G - Physics – 01 – N

Patent

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Details

G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2698351

This invention relates, e.g., to a set of calibrants for determining the amount in a sample of an analyte (e.g., a protein, such as a protein that has been post-translationally modified), comprising a plurality of calibrants, which contain a range of amounts (e.g., defined amounts and/or serial dilutions) of the analyte, spanning the expected amount of the analyte in the sample. In each of the calibrants, a defined amount of the analyte is present in the same suitable, biological diluent (e.g., a cell or tissue lysate, or a bodily fluid). In one embodiment of the invention, the diluent reflects the same or a similar biological milieu (proteins, lipids, serum proteins, serum matrix proteins, etc.) as that in the sample in which the analyte to be measured is present. In embodiments of the invention, a single calibrant (e.g., a cell lysate) may comprise as many as hundreds of analytes, and can be used for the quantification of those hundreds of analytes in a sample. Methods are described for performing an assay (e.g. RPMA analysis), in which the calibrants of a set of calibrants of the invention are immobilized on each of the surfaces to which samples to be analyzed are immobilized, thereby providing an internal calibration curve for quantifying an RPMA assay.

Cette invention concerne, par exemple, un jeu d'étalons destinés à déterminer la quantité d'un analyte (par exemple, une protéine, telle qu'une protéine qui a été modifiée après la traduction) dans un échantillon, composé d'une pluralité d'étalons qui contiennent une plage de quantités (par exemple, des quantités définies et/ou des dilutions en série) de l'analyte, couvrant la quantité attendue de l'analyte dans l'échantillon. Dans chaque étalon, une quantité définie de l'analyte est présente dans le même diluant biologique approprié (par exemple, une cellule ou un lysat cellulaire, ou un liquide corporel). Dans un mode de réalisation de la présente invention, le diluant reflète le même milieu biologique ou un milieu biologique similaire (protéines, lipides, protéines sériques, protéines de la matrice sérique, etc.) comme celui dans l'échantillon dans lequel l'analyte à doser est présent. Dans des modes de réalisation de l'invention, un seul étalon (par exemple, un lysat cellulaire) peut comprendre jusqu'à des centaines d'analytes et peut servir à la quantification de ces centaines d'analytes dans un échantillon. Des procédés faisant l'objet de cette invention permettent de réaliser un test (par exemple, une analyse RPMA), dans lequel les étalons faisant partie d'un jeu d'étalons de l'invention sont immobilisés sur chacune des surfaces sur lesquelles les échantillons à analyser sont immobilisés, fournissant de cette manière une courbe d'étalonnage interne pour quantifier un test RPMA.

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