A - Human Necessities – 61 – B
Patent
A - Human Necessities
61
B
A61B 10/00 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G06F 17/00 (2006.01)
Patent
CA 2291730
Imaging hardware, software, calibrants and methods are provided to visualize and quantitate the amount of Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) occurring between donor and acceptor molecules in epifluorescence microscopy (1). The MicroFRET system compensates for overlap among donor, acceptor and FRET spectra using well characterized fluorescent beads as standards in conjunction with radiometrically calibrated image processing techniques. The MicroFRET system also provides precisely machined epifluorescence cubes (4) to maintain proper image registration as the sample is illuminated (3) at the donor and acceptor excitation wavelengths. Algorithms are described that pseudocolor the image to display pixels exhibiting radiometrically-corrected fluorescence emission from the donor (blue), the acceptor (green) and FRET (red). The method is demonstrated on samples exhibiting FRET between genetically engineered derivatives of the Green Fluorescent Protein (GFP) bound to the surface of Ni chelating beads by histidine-tags.
On utilise des appareils, des logiciels d'imagerie, des agents d'étalonnage et des procédés d'imagerie pour visualiser et quantifier la quantité des transferts d'énergie de résonance par fluorescence (TERF) qui existent entre des molécules donneuses et des molécules accepteuses en microscopie (1) par épifluorescence. Le système MicroFRET compense le chevauchement des spectres de molécules donneuses, des molécules accepteuses et du TERF, en utilisant des billes fluorescentes bien caractérisées servant d'étalons de mesure, conjointement avec des techniques de traitement d'images radiométriquement étalonnées. Le système MicroFRET utilise également des cubes (4) d'épifluorescence usinés avec précision pour maintenir le bon alignement de l'image lorsque l'échantillon est éclairé (3) aux longueurs d'ondes d'excitation des molécules donneuses et accepteuses. On décrit des algorithmes qui pseudocolorent l'image pour présenter des pixels mettant en évidence l'émission de fluorescence radiométriquement corrigée entre les molécules donneuses (bleue), les molécules accepteuses (vert) et le TERF (rouge). Le procédé est utilisé sur des échantillons présentant un transfert d'énergie de résonance par fluorescence (TERF) entre des dérivés produits par génie génétique de la protéine fluorescente verte (PFGV) liée à la surface de billes chélatantes Ni par des marqueurs histidines.
Bylina Edward J.
Coleman William J.
Dilworth Michael R.
Silva Christopher M.
Yang Mary M.
Kairos Scientific Inc.
Mbm Intellectual Property Law Llp
LandOfFree
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