C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01)
Patent
CA 2734340
The present invention inter alia pertains to a method for generating or selecting a eukaryotic host cell expressing a desired level of a polypeptide of interest, comprising: a) providing a plurality of eukaryotic host cells comprising a heterologous nucleic acid comprising at least one cassette (Cas-POI) comprising at least a first polynucleotide (Pn-POI) encoding the polypeptide of interest, at least one stop codon down-stream of the first polynucleotide, and a second polynucleotide downstream of the stop codon encoding an immunoglobulin transmembrane anchor or a functional variant thereof; b) cultivating the eukaryotic host cells to allow expression of the polypeptide of interest such that at least a portion of the polypeptide of interest is expressed as a fusion polypeptide comprising the immunoglobulin transmembrane anchor or a functional variant thereof, wherein said fusion polypeptide is being displayed on the surface of said host cell; c) selecting at least one eukaryotic host cell based upon the presence or amount of the fusion polypeptide displayed on the cell surface. Also provided are host cells, comprising respectively designed heterologous nucleic acids and methods for producing a polypeptide using respective host cells.
La présente invention concerne, entre autres, un procédé pour générer ou sélectionner une cellule hôte eucaryote exprimant un taux souhaité dun polypeptide dintérêt, comprenant : a) la production dune pluralité de cellules hôtes eucaryotes comprenant un acide nucléique hétérologue comprenant au moins une cassette (Cas-POI) comprenant au moins un premier polynucléotide (Pn-POI) codant pour le polypeptide dintérêt, au moins un codon stop en aval du premier polynucléotide, et un deuxième polynucléotide en aval du codon stop codant pour un ancrage transmembranaire dimmunoglobuline ou un variant fonctionnel de celui-ci; b) la culture des cellules hôtes eucaryotes pour permettre lexpression du polypeptide dintérêt de sorte quau moins une partie du polypeptide dintérêt soit exprimée sous la forme dun polypeptide de fusion comprenant lancrage transmembranaire dimmunoglobuline ou un variant fonctionnel de celui-ci, où ledit polypeptide de fusion est présenté sur la surface de ladite cellule hôte; c) la sélection dau moins une cellule hôte eucaryote sur la base de la présence ou la quantité du polypeptide de fusion présenté sur la surface cellulaire. La présente invention concerne en outre des cellules hôtes, comprenant des acides nucléiques hétérologues respectivement conçus et des procédés pour produire un polypeptide utilisant des cellules hôtes respectives.
Jostock Thomas
Knopf Hans-Peter
Nommay Audrey Josiane
Wilms Burkhard
Fetherstonhaugh & Co.
Novartis Ag
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1676934