C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/12 (2006.01) C12N 15/56 (2006.01) C12Q 1/34 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01)
Patent
CA 2544688
Methods and compositions are provided for determining cell membrane protein populations in the cell membrane of a cell and changes in the population due to changes in the environment or status of the cell. The methods employ a cell having a fusion construct of the cell membrane protein linked to a signal producing peptide through an exofacial protease recognition site or sites. The signal producing peptide is either an enzyme fragment capable of binding to a second enzyme fragment to form an active enzyme when released from the cell membrane or has two binding sites, where the complementary binding entities are related in that a signal is produced when the two entities are in proximity. For the enzyme signal producing peptide, by adding the protease to the cell and the second enzyme fragment and substrate, one can determine the cell membrane protein population and the effect of changes in the cell environment on such population. Similarly, by adding the two entities and any other necessary reagents, a signal is produced whereby one can determine the cell membrane protein population and the effect of changes in the cell environment on such population.
La présente invention concerne des techniques et des compositions permettant de déterminer des populations de protéines à membrane cellulaire dans la membrane cellulaire d'une cellule et des changements dans cette population dus aux modifications de l'environnement ou de l'état de la cellule. Cette technique utilise une cellule possédant un construit de fusion de la protéine à membrane cellulaire liée à un peptide producteur de signal par un site ou des sites de reconnaissance de protéase exofaciale. Ce peptide producteur de signal est soit un fragment d'enzyme capables de se lier à un second fragment d'enzyme de façon à former une enzyme active lorsqu'elle est libérée de la membrane cellulaire, soit il possède deux sites de liaison, ces entités de liaison complémentaires étant associées au fait qu'un signal est produit lorsque les deux entités sont à proximité. Pour le peptide producteur de signal d'enzyme, par l'addition de protéase à la cellule et au second fragment d'enzyme et au substrat, on peut déterminer la population de protéines à membrane cellulaire et l'effet des modifications dans l'environnement de la cellule sur cette population. De la même façon, par l'addition des deux entités et de n'importe quel autre réactif nécessaire, un signal est produit grâce auquel on peut déterminer la population de protéines à membrane cellulaire et l'effet des modifications dans l'environnement de la cellule de cette population. .
Eglen Richard M.
Horecka Joseph L.
Discoverx Corporation
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1701983