Cellulase variants

Details Cellulase variants Cellulase variants

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 9/42 (2006.01) C11D 3/386 (2006.01)

Patent

CA 2265914

A method for improving the properties of a cellulolytic enzyme by amino acid substitution, deletion or insertion, the method comprising the steps of. a) constructing a multiple alignment of at least two amino acid sequences known to have three-dimensional structures similar to endoglucanase V (EGV) from Humicola insolens known from Protein Data Bank entry 4ENG; b) constructing a homology-built three-dimensional structure of the cellulolytic enzyme based on the structure of the EGV; c) identifying amino acid residue positions present in a distance from the substrate binding cleft of not more than 5..ANG.; d) identifying surface-exposed amino acid residues of the enzyme; e) identifying all charged or potentially charged amino acid residue positions of the enzyme; f) choosing one or more positions wherein the amino acid residue is to be substituted, deleted or where an insertion is to be provided; g) carrying out the substitution, deletion or insertion by using conventional protein engineering techniques; and cellulase variants obtained by the method.

Cette invention se rapporte à un procédé permettant d'améliorer les propriétés d'une enzyme cellulolytique par substitution, délétion ou insertion d'acides aminés, ce procédé consistant: a) à construire un alignement multiple d'au moins deux séquences d'acides aminés connues pour avoir des structures tridimensionnelles similaires à l'endoglucanase V (EGV) provenant de Humicola insolens que l'on peut trouver dans l'entrée 4ENG de la banque de données sur les protéines; b) à construire une structure tridimensionnelle homologue de cette enzyme cellulolytique sur la base de la structure de l'EGV; c) à identifier les positions des restes d'acides aminés présentes à une distance de la fente de fixation du substrat qui n'est pas supérieure à 5 .ANG.; d) à identifier les restes d'acides aminés de cette enzyme exposés à la surface; e) à identifier dans cette enzyme toutes les positions des restes d'acides aminés chargées ou potentiellement chargées; f) à choisir une ou plusieurs positions dans lesquelles le reste d'acides aminés doit subir une substitution, une délétion ou une insertion; et g) à effectuer cette substitution, cette délétion ou cette insertion en utilisant les techniques traditionnelles d'ingénierie des protéines; cette invention se rapportant également aux variants de cellulase obtenus par ce procédé.

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