Characterising dna

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2287496

Provided is a method for characterising cDNA, which method comprises: (a) exposing a sample comprising a population of one or more cDNAs or fragments thereof to a cleavage agent which recognises a predetermined sequence and cuts at a reference site at a known displacement from the predetermined sequence proximal to an end of each cDNA or fragment thereof so as to generate a population of terminal fragments; (b) ligating to each reference site an adaptor oligonucleotide which comprises a recognition site for a sampling cleavage agent; (c) exposing the population of terminal fragments to a sampling cleavage agent which binds to the recognition site and cuts at a sampling site of known displacement from the recognition site so as to generate in each terminal fragment a sticky end sequence of a predetermined length of up to 6 bases, and of unknown sequence; (d) separating the population of terminal fragments into sub-populations according to sequence length; and (e) determining each sticky end sequence.

Cette invention concerne un procédé de caractérisation d'ADN qui consiste à: (a) exposer un échantillon contenant une population d'au moins un ADNc ou de fragment(s) de ce(s) dernier(s) à un agent de clivage qui reconnaît une séquence prédéterminée et coupe au niveau d'un site de référence à un déplacement connu par rapport à la séquence prédéterminée à proximité d'une extrémité de chaque ADNc ou de chaque fragment de ce dernier de manière à générer une population de fragments terminaux; (b) lier à chaque site de référence un oligonucléotide adaptateur qui comprend un site de reconnaissance pour un agent de clivage d'échantillon; (c) exposer la population de fragments terminaux à un agent de clivage d'échantillon qui se lie au site de reconnaissance et coupe par rapport au site d'échantillon de déplacement connu par rapport au site de reconnaissance de manière à générer dans chaque fragment terminal une séquence terminale cohésive d'une longueur prédéterminée pouvant compter jusqu'à 6 bases et de séquence inconnue; (d) séparer la population de fragments terminaux en sous-populations en fonction de la longueur de la séquence; et (e) déterminer chaque séquence terminale cohésive.

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