C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/82 (2006.01) C07K 14/415 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/56 (2006.01) C12N 15/65 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2232741
The nucleic acid sequence of the full-length, chemically inducible Arabidopsis PR-1 promoter has been discovered and is disclosed herein. Furthermore, cis- acting regulatory elements in the Arabidopsis PR-1 promoter involved in chemical induction have been characterized using deletion and linker-scanning mutagenesis and in vivo footprinting. It has been discovered that at least a portion of the region of promoter between positions -698 and -621 (relative to the transcription start site of the PR-1 gene) is required for induction of gene expression by chemicals. Two 10-bp linker-scanning mutations centered at 640-bp and 610-bp upstream from the transcription start site abolish the inducibility of the promoter while another 10-bp mutation centered at -670 bp results in average induced expression levels 4-fold higher than the unmutated promoter. Additionally, inducible in vivo footprints are located at positions - 629 and -628 and at position -604 on the coding strand and at position -641 on the non-coding strand. The use of chemically inducible Arabidopsis PR-1 promoter fragments to regulate gene expression in plants in the presence of inducing chemicals such as SA, INA, and BTH is disclosed, as well as the use of these elements for the isolation of transcriptional regulatory proteins involved in the promoter regulation and for the construction of inducible hybrid promoters.
La présente invention se rapporte à la séquence d'acides nucléiques du promoteur du PR-1 d'Arabidopsis, chimiquement inductible et pleine longueur. Elle se rapporte en outre à des éléments de régulation, agissant en cis, du promoteur du PR-1 d'Arabidopsis intervenant dans l'induction chimique, que l'on a caractérisé au moyen de mutagenèses par délétion et par balayage d'une séquence de liaison et d'empreintes in vivo. On a découvert qu'au moins une partie de la région du promoteur située entre les positions -698 et -621 (relativement au site de démarrage de la transcription du gène PR-1) est nécessaire à l'induction de l'expression génique par des produits chimiques. Deux mutations par balayage d'une séquence de liaison sur 10 paires de bases, centrées au niveau de la paire de bases 640 et au niveau de la paire de bases 610, en amont du site de démarrage de la transcription, suppriment l'inductibilité du promoteur tandis qu'une autre mutation de 10 paires de bases centrée au niveau de la paire de bases 670 engendre des niveaux d'expression induite moyenne quatre fois supérieurs à ceux du promoteur qui n'a pas subi de mutation. Par ailleurs, des empreintes in vivo inductibles sont disposées en positions -629 et -628 et en position -604 sur le brin codant et en position -641 sur le brin non codant. L'invention se rapporte également à l'utilisation de fragments du promoteur du PR-1 d'Arabidopsis, inductibles chimiquement pour réguler l'expression génique dans des plantes en présence de produits chimiques inducteurs du type SA, INA et BTH, ainsi qu'à l'utilisation de ces éléments pour isoler des protéines régulatrices transcriptionnelles intervenant dans la régulation du promoteur et pour synthétiser des promoteurs hybrides inductibles.
Lebel Edouard Guillaume
Ryals John Andrew
Thorne Leigh
Uknes Scott Joseph
Ward Eric Russell
Fetherstonhaugh & Co.
Novartis Ag
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1361890