C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/55 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 9/16 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01)
Patent
CA 2223980
Plasmids pLP2-1531, which encodes chondroitinases I and II, and pLP2-1521, which encodes chondroitinase I, are provided. These plasmids are used to transform wild-type E. coli and P. vulgaris cells. The transformed cells produce DNA encoding the production of chondroitinases I and II or chondroitinase I in the absence of natural exogenous chondroitinases I and II inducers. Additionally, the transformed P. vulgaris cells in the absence of exogenous chondroitinases I and II inducers, produce the respective enzymes in amounts in excess of those produced by wild-type P. vulgaris in the presence of exogenous chondroitinases I and II inducer(s). Starting plasmid pLP2-751 and intermediate plasmids pLP2-770, pLP2-1512, pLP2-1263, pLP2-1508, pLP2- 1510, pLP2-1514, pLP2-1518, and pLP2-1525 are also provided. These intermediate plasmids are typically used in the preparation of pLP2-1531 and pLP2-1521. A BglII/EcoRI fragment of about 3970 bp derived from pLP2-1512, a EcoRI/SmaI fragment of about 2550 bp derived from pLP2-1514, and a BglII/SmaI(AvaI) fragment of about 6520 bp derived from pLP2-1518 are further disclosed. Also contemplated is the use of transformed P. vulgaris cells to produce chondroitinase I and/or II. The P. vulgaris cells above are cultured in a bacterial culture medium and in the absence of an exogenous chondroitinase I and II inducer. The cells are then harvested from the culture, and the chondroitinase I and/or II enzymes are recovered.
L'invention se rapporte au plasmide pLP?2¿-1531, qui code les chondroitinases I et II, et au plasmide pLP?2¿-1521, qui code la chondroitinase I. On utilise ces plasmides pour transformer les cellules E. coli et P. vulgaris de type sauvage. Les cellules transformées produisent de l'ADN qui code la production des chondroitinases I et II ou de la chondroitinase I en l'absence des inducteurs exogènes naturels des chondroitinases I et II. En outre, les cellules transformées de P. vulgaris produisent en l'absence des inducteurs exogènes des chondroitinases I et II les enzymes respectifs dans des proportions supérieures à celles produites par le P. vulgaris de type sauvage en présence du ou des inducteurs exogènes des chondroitinases I et II. Le plasmide de départ pLP?2¿-751 et les plasmides intermédiaires pLP?2¿-770, pLP?2¿-1512, pLP?2¿-1263, pLP?2¿-1508, pLP?2¿1510, pLP?2¿-1514, pLP?2¿-1518, et pLP?2¿-1525 sont également décrits dans l'invention. Ces plasmides intermédiaires sont généralement utilisés dans la préparation des plasmides pLP?2¿-1531 et pLP?2¿-1521. On décrit par ailleurs un fragment BglII/EcoRI d'environ 3970 bp provenant du plasmide pLP?2¿-1512, un fragment EcoRI/SmaI d'environ 2550 bp provenant du plasmide pLP?2¿-1514, et un fragment BglII/SmaI(AvaI) d'environ 6520 bp provenant du plasmide pLP?2¿-1518. Enfin, on envisage l'utilisation des cellules transformées de P. vulgaris en vue de produire la chondroitinase I et/ou la chondroitinase II. Lesdites cellules P. vulgaris sont mises en culture dans un milieu de culture bactérienne, en l'absence d'inducteur exogènes des chondroitinases I et II. Une fois les cellules recueillies, on peut extraire les enzymes que constitue la chondroitinase I et/ou la chondroitinase II.
Khandke Kiran Manohar
Lotvin Jason Arnold
Ruppen Mark Edward
American Cyanamid Company
Smart & Biggar
LandOfFree
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