Chromogenic substrate with a ph indicator dye

G - Physics – 01 – N

Patent

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G01N 33/53 (2006.01) C12Q 1/28 (2006.01)

Patent

CA 2519314

A composition for an enzyme-linked assay is described which comprises a chromogenic substrate that produces a detectable color with a maximum absorbance at one wavelength in reactions of the assay which contain the enzyme and a pH indicator dye that produces a detectable color with a maximum absorbance at a second wavelength when the pH of the reactions of the assay is changed to terminate the reactions. The chromogenic substrate enables colorimetric detection of the bindable substance in positive reactions of the assay and the pH indicator dye enables negative reactions of the assay to be colorimetrically distinguished from false negative 3,3',5,5'- tetramethylbenzidine (TMB) and the pH indicator dye is preferably selected from the group consisting of cresol red and m-cresol purple.

L'invention concerne une composition destinée à un test d'activité enzymatique. Cette composition comprend un substrat chromogène qui produit une couleur détectable présentant une absorbance maximale à une première longueur d'onde dans des réactions du test qui contiennent l'enzyme et un colorant indicateur de pH qui produit une couleur détectable présentant une absorbance maximale à une seconde longueur d'onde lorsque le pH des réactions du test est modifié pour mettre fin aux réactions. Le substrat chromogène permet d'effectuer une détection colorimétrique de la substance liable dans des réactions positives du test et le colorant indicateur de pH permet de distinguer, sur le plant colorimétrique, les réactions négatives du test des réactions faussement négatives. De préférence, la composition est utilisée dans des tests immuno-enzymatiques, tels que des tests ELISA. Mieux encore, l'enzyme est une peroxydase. Dans un autre mode de réalisation préféré, le substrat chromogène est la 3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine (TMB) et le colorant indicateur de pH est choisi de préférence dans le groupe constitué de rouge de crésol et de violet de m-crésol.

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