C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C12N 9/04 (2006.01) C12N 9/60 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01)
Patent
CA 2303408
Methods for altering a selected chromosomal locus in P. methanolica cells and cells comprising such altered loci are disclosed. A linear DNA construct comprising (i) a segment comprising a portion of the target locus in which at least one nucleotide pair is altered and (ii) a selectable marker that complements adenine auxotrophy is introduced into cells auxotrophic for adenine. The cells are cultured under selective conditions, and cells in which the linear DNA construct has been chromosomally integrated by homologous recombination are identified. The cells are then cultured under conditions whereby cells auxotrophic for adenine can be identified, and a subset of such cells in which the altered locus has been chromosomally integrated are identified.
Procédés servant à modifier un locus chromosomique sélectionné dans des cellules de Pichia methanolica et cellules présentant ces loci modifiés. On introduit dans des cellules auxotrophes pour l'adénine un produit de recombinaison d'ADN linéaire composé (i) d'un segment contenant une partie du locus ciblé dans lequel au moins une paire de nucléotides est modifiée et (ii) d'un marqueur spécifique complétant l'auxotrophie pour l'adénine. On cultive ces cellules dans des conditions sélectives et on identifie les cellules dans lesquelles le produit de recombinaison d'ADN linéaire a été intégré de façon chromosomique par recombinaison homologue. On cultive ensuite ces cellules dans des conditions permettant d'identifier les cellules auxotrophes pour l'adénine et on identifie un sous-ensemble de ces cellules dans lesquelles le locus a été intégré de façon chromosomique.
Smart & Biggar
Zymogenetics Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1648166