C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 14/36 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01)
Patent
CA 2324205
Circularly permuted proteins are described wherein the natural termini of the polypeptide are joined and the resulting circular protein is opened at another point to create new C- and N-termini. The resulting protein exhibits some altered characteristic such as reduced substrate binding, for example. Fusion proteins can be made from the circularly permuted protein by attaching the second polypeptide to these newly created termini. These fusion proteins will have altered properties from a fusion protein made by attaching the second polypeptide to the natural termini. For example, the second peptide or protein can be attached at a position where it is more accessible to its substrate or intended target. In the preferred embodiment, the base polypeptide is streptavidin. Circular permutation of streptavidin results in a circularly permuted biotin binding protein. In one embodiment, a flexible polypeptide loop important for the binding of biotin was opened by creation of the circularly permuted protein. The original termini (residues 13 and 139 of Sequence ID NO:1) were joined by a linker. The biotin association constant was reduced approximately six orders of magnitude below that of wild type streptavidin to 107 M-1. Fusion proteins of the circularly permuted streptavidin can be made with secondary peptides/proteins such as IgG binding protein A or single-chain antibodies.
L'invention concerne des protéines permutées circulairement dans lesquelles les terminaisons naturelles du polypeptide sont réunies, et la protéine circulaire obtenue est ouverte à un autre point pour former de nouvelles terminaisons C- et N-. La protéine obtenue présente des caractéristiques modifiées telles qu'une capacité réduite de liaison au substrat, par exemple. On peut produire des protéines de fusion à partir de la protéine permutée circulairement en fixant le deuxième polypeptide à ces nouvelles terminaisons. Ces protéines de fusion présentent des propriétés modifiées par rapport à une protéine de fusion obtenue en liant le deuxième polypeptide aux terminaisons naturelles. Par exemple, le deuxième peptide ou la deuxième protéine peut être lié(e) à une position où il/elle ne peut plus être atteint(e) par son substrat ou par sa cible prévue. Dans le mode de réalisation préféré, le polypeptide de base est la streptavidine. Une permutation circulaire de la streptavidine permet d'obtenir une protéine de liaison à la biotine permutée circulairement. Dans un mode de réalisation, une boucle de polypeptide souple qui est importante pour la liaison à la biotine a été ouverte par la formation de la protéine permutée circulairement. Les terminaisons initiales (résidus 13 et 139 de la séquence ID NO:1) sont réunies par un élément de liaison. La constante d'association à la biotine a été réduite approximativement de six degrés d'intensité par rapport à celle de la streptavidine de type sauvage, à 10?7¿ M?-1¿. Des protéines de fusion de la streptavidine permutée circulairement peuvent être formées à l'aide de peptides/protéines secondaires telles que la protéine A fixatrice d'IgG ou des anticorps à une seule chaîne.
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
University Of Washington
LandOfFree
Circularly permuted biotin binding proteins does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Circularly permuted biotin binding proteins, we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Circularly permuted biotin binding proteins will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1868984