C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/57 (2006.01) A23J 3/30 (2006.01) A23L 1/23 (2006.01) A23L 1/38 (2006.01) C12N 1/15 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 9/48 (2006.01) C12P 21/06 (2006.01)
Patent
CA 2295136
The invention has for object the new recombinant prolyl-dipeptidyl-peptidase enzyme (DPP IV) from Aspergillus oryzae comprising the amino-acid sequence from amino acid 1 to amino acid 755 of SEQ ID NO:2 or functional derivatives thereof, and providing a high level of hydrolysing specificity towards proteins and peptides starting with X-Pro- thus liberating dipeptides of X-Pro type, wherein X is any amino acid. The invention also provides a DNA molecule encoding the enzyme according to the invention, cells expressing the enzyme according to the invention by recombinant technology, an Aspergillus naturally providing a prolyl-dipeptidyl-peptidase activity which has integrated multiple copies of the Aspergillus native promoter which naturally directs the expression of the gene encoding the prolyl-dipeptidyl-peptidase activity, Aspergillus naturally providing a prolyl-dipeptidyl-peptidase activity which is manipulated genetically so that the dppIV gene is inactivated. The invention provides a method for producing the enzyme according to the invention, comprising cultivating the cells of the invention in a suitable growth medium under conditions that the cells express the enzyme, and optionally isolating the enzyme in the form of a concentrate. The invention provides the use of the enzyme or the cells of the invention to hydrolyse protein containing materials. The invention provides the use of an enzyme and/or a cell providing a prolyl-dipeptidyl-peptidase activity, in combination with at least an enzyme providing a prolidase to hydrolyse protein containing materials. In a last further aspect, the invention provides a food product comprising a protein hydrolysate obtainable by fermentation with at least a microorganism providing a prolyl-dipeptidyl-peptidase activity higher than 50 mU per ml when grown in a minimal medium containing 1 % (w/v) of wheat gluten.
L'invention concerne la nouvelle enzyme de recombinaison prolyle-dipeptidyle-peptidase (DPP IV) provenant d'Aspergillus oryzae, comprenant la séquence d'acides aminés de 1 à 755 de SEQ ID NO:2 ou ses dérivés fonctionnels et produisant un niveau élevé de spécificité d'hydrolyse en faveur de protéines et de peptides à partir de X-Pro-, ce qui libère des dipeptides de type X-Pro, X étant tout acide aminé. Elle concerne également une molécule d'ADN codant cette enzyme, des cellules exprimant cette enzyme par des techniques de recombinaison, un Aspergillus exerçant naturellement une activité de prolyle-dipeptidyle-peptidase et possédant des copies multiples intégrées du promoteur natif Aspergillus dirigeant naturellement l'expression du gène codant l'activité de la prolyle-dipeptidyle-peptidase, Aspergillus exerçant naturellement une activité de prolyle-dipeptidyle-peptidase manipulée génétiquement, de façon à inactiver le gène dppIV. Elle concerne un procédé servant à produire cette enzyme et consistant à cultiver les cellules objets de l'invention dans un milieu de culture approprié dans des conditions permettant aux cellules d'exprimer l'enzyme, et à isoler éventuellement l'enzyme sous forme de concentré. Elle concerne l'utilisation de cette enzyme ou de ces cellules afin d'hydrolyser des matériaux contenant des protéines. Elle concerne l'utilisation soit d'une enzyme, soit d'une cellule exerçant une activité de prolyle-dipeptidyle-peptidase, combinée à au moins une enzyme produisant une prolidase afin d'hydrolyser des matériaux contenant des protéines. Dans un autre dernier aspect, elle concerne un produit alimentaire contenant un hydrolysat protéiné qu'on obtient par fermentation avec au moins un micro-organisme exerçant une activité de prolyle-dipeptidyle-peptidase supérieure à 50 mU par ml quand on le cultive dans un milieu minimum contenant 1 % en poids et en volume de gluten de blé.
Affolter Michael
Doumas Agnes
Monod Michel
Van Den Broek Peter
Borden Ladner Gervais Llp
Societe Des Produits Nestle S.a.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1348057