Codon optimized cftr

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A - Human Necessities

61

K

A61K 48/00 (2006.01)

Patent

CA 2665620

A synthetic hCFTR DNA sequence has been developed that produces remarkably high levels of hCFTR mRNA and protein in dosed murine lungs and human cells in culture compared to the natural hCFTR cDNA. This synthetic DNA addresses.problems inherent in some natural cDNAs, such as premature transcriptional truncation sites introduced during cDNA synthesis. Introns are initially present in mRNA until the mRNA is processed. cDNA made from processed mRNA is devoid of introns. Thus DNA sequences (exon junctions) are present in a cDNA molecule which are not present in cells in nature. These exon junctions may affect transcription. Methods for improving expression of CFTR are based on sequence changes in cDNA molecules. The improvement methods may be applied to other cDNA molecules which are refractory to in vivo expression efforts. Compositions embodying the sequence changes increase the production of both transgenic mRNA and protein from cDNA molecules.

On a développé une séquence d'ADN hCFTR synthétique qui produit des niveaux remarquablement élevés de d'ARNm hCFTR et de protéine dans des cellules humaines et pulmonaires murines en culture par comparaison avec l'ADNc hCFTR naturel. Cet ADN synthétique permet de régler des problèmes inhérents à certains ADNc naturels, comme l'introduction de sites de troncature transcriptionnelle prématurée durant la synthèse de l'ADNc. Des introns sont présents initialement dans l'ARNm jusqu'au traitement de l'ARNm. L'ADNc issu d'ARNm traitée est dépourvu d'introns. Ainsi, des séquences d'ADN (jonctions d'exons) sont présentes dans une molécule d'ADNc, qui ne sont pas présentes dans les cellules à l'état naturel. Ces jonctions d'exons peuvent affecter la transcription. Les procédés d'amélioration de l'expression de CFTR reposent sur des changements de séquences dans les molécules d'ADNc. Il est possible d'appliquer des procédés d'amélioration à d'autres molécules d'ADNc qui sont réfractaires aux efforts d'expression in vivo. Des compositions incorporant les changements de séquences et augmentent la production d'ARNm transgénique et de protéine à partir des molécules d'ADNc.

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