C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/56 (2006.01) C12N 1/15 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01) C12N 9/24 (2006.01) C12N 15/54 (2006.01) C12N 15/79 (2006.01) C12N 15/80 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01) C40B 40/02 (2006.01) C40B 40/08 (2006.01)
Patent
CA 2516440
The present invention relates to eukaryotic host cells having modified oligosaccharides which may be modified further by heterologous expression of a set of glycosyltransferases, sugar transporters and mannosidases to become host-strains for the production of mammalian, e.g., human therapeutic glycoproteins. The invention provides nucleic acid molecules and combinatorial libraries which can be used to successfully target and express mammalian enzymatic activities such as those involved in glycosylation to intracellular compartments in a eukaryotic host cell. The process provides an engineered host cell which can be used to express and target any desirable gene(s) involved in glycosylation. Host cells with modified oligosaccharides are created or selected. N-glycans made in the engineered host cells have a Man5GlcNAc2 core structure which may then be modified further by heterologous expression of one or more enzymes, e.g., glycosyltransferases, sugar transporters and mannosidases, to yield human-like glycoproteins. For the production of therapeutic proteins, this method may be adapted to engineer cell lines in which any desired glycosylation structure may be obtained.
L'invention concerne des cellules eucaryotes hôtes contenant des oligosaccharides modifiés pouvant être encore modifiés par l'expression hétérologue d'un ensemble de glycosyltransférases, de transporteurs glucidiques et de mannosidases, de sorte à devenir des souches hôtes permettant la production de glycoprotéines thérapeutiques mammifères, humaines par exemple. L'invention concerne des molécules d'acides nucléiques et des banques combinatoires pouvant être utilisées pour cibler et exprimer aisément des activités enzymatiques mammifères, telles que celles impliquées dans la glycosylation dans les compartiments intracellulaires d'une cellule eucaryote hôte. Le procédé selon l'invention permet d'obtenir une cellule hôte génétiquement modifiée pouvant être utilisée pour exprimer et cibler n'importe quel gène impliqué dans la glycosylation. Des cellules hôtes à oligosaccharides modifiés sont ainsi créées ou sélectionnées. Les N-glycanes produits dans lesdites cellules hôtes génétiquement modifiées présentent une structure de noyau Man¿5?GlcNAc¿2? pouvant ensuite être modifiée encore par l'expression hétérologue d'au moins une enzyme, telles que des glycosyltransférases, des transporteurs glucidiques et des mannosidases, de sorte à produire des glycoprotéines de type humain. En ce qui concerne la production de protéines thérapeutiques, le procédé selon l'invention peut être adapté pour produire des lignées cellulaires dans lesquelles n'importe quelle structure de glycosylation peut être obtenue. ¿ ?
Bobrowicz Piotr
Choi Byung-Kwon
Davidson Robert C.
Gerngross Tillman U.
Hamilton Stephen R.
Bobrowicz Piotr
Choi Byung-Kwon
Davidson Robert C.
Gerngross Tillman U.
Glycofi Inc.
LandOfFree
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