C - Chemistry – Metallurgy – 40 – B
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
40
B
C40B 40/10 (2006.01) C40B 30/04 (2006.01) C40B 40/02 (2006.01) C40B 40/08 (2006.01) C40B 50/06 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) C12N 15/73 (2006.01)
Patent
CA 2430953
A novel family of protein libraries comprising CTLDS (C-type Lectin-Like Domains) in which internal polypeptide loop-regions lining the ligand binding sites in CTLDs have been replaced with ensembles of completely or partially randomised polypeptide segments. Tetranectin CTLDs were chosen as framework for the preferred embodiment of the invention; and versatile phagemid vectors useful in the generation and manipulation of human and murine tetranectin CTLD libraries are disclosed as part of this invention. Tetranectin CTLDs in monomeric as well as in trimeric form are efficiently displayed as gene III fusions in fully functional form by the recombinant fd phage display vector. CTLD derivatives with affinity for new ligands may readily be isolated from libraries of vectors displaying CTLDs, in which loop-regions have been randomised, using one or more rounds of enrichment by screening or selection followed by amplification of the enriched subpopulation in each round. The efficiency with which protein products containing CTLDs with new binding properties can be produced, e.g. by bacterial expression in in vitro refolding, in mono-, tri-, or multimeric formats provides important advantages in terms of simplicity, cost and efficiency of generation, production and diagnostic or therapeutic applications in comparison to recombinant antibody derivatives.
La présente invention concerne une famille d'échantillothèques de protéines comprenant des domaines lectinoïdes de type C ou "CTLD" (pour "C-type Lectin-Like Domains") dans lesquelles les régions en boucle polypeptides internes garnissant les sites de liaison des ligands dans les CTLD ont été remplacées par des ensembles de segments polypeptides complètement ou partiellement randomisés. Ce sont les CTLD des tétranectines qui ont été choisis comme structure de référence pour le mode de réalisation préféré de l'invention. L'invention concerne également des vecteurs phagemides polyvalents convenant particulièrement à la génération et la manipulation des échantillothèques de CTLD des tétranectines humaines et murines. Que ce soit sous forme de monomères ou de trimères, les CTLD des tétranectines se présentent efficacement en tant que fusions de gènes III d'une forme totalement fonctionnelle au niveau du vecteur de présentation "fd phage" de recombinaison. Les dérivés CTLD disposant d'une affinité pour de nouveaux ligands sont faciles à isoler à partir des échantillothèques de vecteurs à CTLD, dans la mesure où des régions en boucle ont été randomisées. Il suffit à cet effet de faire un ou plusieurs cycles d'enrichissement par criblage ou sélection, et de poursuivre par une amplification des sous-populations enrichies dans chaque cycle. On apprécie l'efficacité avec laquelle les produits de protéines contenant les CTLD présentant les nouvelles propriétés de liaison peuvent être produites, notamment par expression bactérienne dans un repliage in-vitro, dans des formats monomères, trimères ou multimères. Cela vaut tout particulièrement pour ce qui est de la simplicité, des coûts et de la puissance de la génération, de la production et des applications diagnostic ou thérapeutiques par comparaison avec les dérivés d'anticorps de recombinaison.
Etzerodt Michael
Graversen Niels Jonas Heilskov
Holtet Thor Las
Thogersen Hans Christian
Anaphore Inc.
Borean Pharma A/s
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
LandOfFree
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