C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07K 16/00 (2006.01) C12N 1/20 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/13 (2006.01) C40B 30/04 (2006.01) C40B 40/02 (2006.01) C40B 40/10 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01)
Patent
CA 2501188
The invention overcomes the deficiencies of the prior art by providing a rapid approach for isolating binding proteins capable of binding small molecules and peptides. In the technique, libraries of candidate binding proteins, such as antibody sequences, are expressed in the periplasm of gram negative bacteria and mixed with a labeled ligand. In clones expressing recombinant polypeptides with affinity for the ligand, the concentration of the labeled ligand bound to the binding protein is increased and allows the cells to be isolated from the rest of the library. Where fluorescent labeling of the target ligand is used, cells may be isolated by fluorescence activated cell sorting (FACS). The approach is more rapid than prior art methods and avoids problems associated with the outer surface-expression of ligand fusion proteins employed with phage display. The inventors have also provided improved antobodies that were initially prepared using the sceening methods developed.
La présente invention comble les lacunes présentées par la technique antérieure ; elle se rapporte en effet à une technique rapide permettant d'isoler des protéines de liaison pouvant lier de petites molécules et des peptides. Selon ladite technique, des banques de protéines de liaison candidates, telles que des séquences d'anticorps, sont exprimées dans le périplasme de bactéries gram négatif, et mélangées avec un ligand marqué. Des clones exprimant des polypeptides recombinés dotés d'une affinité pour le ligand présentent une plus forte concentration du ligand marqué lié à la protéine de liaison, ce qui permet d'isoler les cellules du reste de la banque. Lorsque l'on utilise le marquage fluorescent du ligand cible, des cellules peuvent être isolées par le tri de cellules activé par la fluorescence (FACS). Ladite technique est plus rapide que les procédés relevant de la technique antérieure, et permet d'éviter des problèmes associés à l'expression de surface extérieure des protéines de liaison aux ligands employées avec l'expression phagique. L'invention a également trait à des anticorps qui ont été préparés initialement à l'aide des procédés de criblage mis au point.
Georgiou George
Harvey Barrett R.
Iverson Brent I.
Board Of Regents The University Of Texas System
Goudreau Gage Dubuc
LandOfFree
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