G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/52 (2006.01) C07K 14/00 (2006.01) G01N 33/533 (2006.01) G01N 33/542 (2006.01) C07K 7/04 (2006.01) C07K 14/59 (2006.01)
Patent
CA 2177976
An improved oligopeptide composition for use in a fluorescent polarization immunoassay for a high molecular weight analyte is disclosed along with a kit and a method using the composition. The composition comprises an oligopeptide selected by a screening procedure in which a plurality of different oligopeptides having respective amino acid sequences that represent sequential overlapping segments of the analyte amino acid sequence, and a fluorescent label bound thereto. The screening process further includes screening to select a composition which exhibits fluorescence enhancement upon binding the analyte. A preferred embodiment of the oligopeptide is one having an amino acid sequence which does not form internal disulfide bridges. Such a preferred oligopeptide will generally have no more than one cysteine residue. In a further preferred embodiment, the fluorescent label is tetramethylrhodamine or a cyanine dye. The kit may be packaged with instructions directing a user to prepare an assay solution containing the monoclonal antibody and the oligopeptide in certain respective concentrations. The composition, method and kit are constructed to detect nanomolar concentrations of the analyte.
On décrit une composition améliorée d'oligopeptides pour une utilisation dans un immunodosage à polarisation de fluorescence, de substances à haut poids moléculaire, ainsi qu'une trousse de réactifs et une méthode utilisant cette composition. La composition comprend un oligopeptide choisi par une procédure de triage dans laquelle on utilise une pluralité de différents oligopeptides portant un marqueur fluorescent et ayant des séquences d'acides aminés communes à des segments d'acides aminés de la substance à doser. Le procédé de triage consiste en outre à sélectionner une composition qui assure une augmentation de la fluorescence lors de la fixation sur la substance à doser. Une forme d'exécution préférée de l'oligopeptide a une séquence d'acides aminés qui ne forme pas de ponts internes bisulfure. Un tel oligopeptide préféré n'aura généralement pas plus d'une unité de cystéine. Dans une autre forme d'exécution préférée, le marqueur fluorescent est la tétraméthylrhodamine ou un colorant basé sur la cyanine. La trousse peut être accompagnée d'un mode d'emploi indiquant à l'utilisateur comment préparer une solution de dosage contenant un anticorps monoclonal et l'oligopeptide à certaines concentrations relatives. La composition, la méthode et la trousse de réactifs sont prévues pour déterminer des concentrations de la substance recherchée de l'ordre de la nanomole.
Herron James N.
Wei Ai-Ping
Oyen Wiggs Green & Mutala Llp
University Of Utah Research Foundation
LandOfFree
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