C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/86 (2006.01) C12N 15/864 (2006.01)
Patent
CA 2366861
A method for producing recombinant adeno-associated virus in the absence of contaminating helper virus or wild-type virus involves culturing a mammalian host cell containing an rAd/AAV hybrid virus, an AAV rep sequence and an AAV cap sequence under the control of regulatory sequences directing expression thereof. The rAd/AAV hybrid virus contains an rAAV construct to be packaged into an AAV virion in a backbone containing the adenoviral sequences necessary to express E1a and E1b gene products and to permit replication of the hybrid virus. The method of the invention permits replication of the hybrid virus and production of rAAV virion in this host cell in the absence of a helper virus and obviates a subsequent purification step to purify rAAV from contaminating virus.
Cette technique de production de virus adéno-associé de recombinaison, sans virus auxiliaire contaminant ou de virus de type sauvage, consiste à cultiver une cellule hôte mammalienne contenant un virus hybride rAd/AAV, une séquence rep AAV et une séquence cap AAV dépendantes pour leur expression de séquences régulatrices. Le virus hybride rAd/AAV contient un produit de recombinaison rAAV à encapsuler dans un virion AAV dans un squelette contenant les séquences adénovirales nécessaires à l'expression des produits géniques E1a et E1b ainsi qu'à la réplication du virus hybride. La technique selon l'invention, qui permet la réplication du virus hybride et la production de virion rAAV dans la cellule hôte en l'absence d'un virus auxiliaire, évite d'avoir à recourir à une phase ultérieure de purification destinée à protéger rAAV de tout virus contaminant.
Gao Guang-Ping
Wilson James M.
Gowling Lafleur Henderson Llp
The Trustees Of The University Of Pennsylvania
LandOfFree
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