C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/864 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 7/01 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01)
Patent
CA 2324225
A method for producing recombinant adeno-associated virus in the absence of contaminating helper virus or wild-type virus involves culturing a mammalian host cell containing a transgene flanked by adeno-associated virus (AAV) inverse terminal repeats and under the control of regulatory sequences directing expression thereof, an AAv rep sequence and an AAV cap sequence under the control of regulatory sequences directing expression thereof; and the minimum adenovirus DNA required to express an Ela gene product, an E1b gene product and an E2a gene product, and isolating therefrom a recombinant AAV which expresses the transgene in the absence of contaminating helper virus or wildtype AAV. This method obviates a subsequent purification step to purify rAAV from contaminating virus. Also provided are various embodiments of the host cell.
L'invention concerne une méthode permettant de produire un virus adéno-associé recombiné en l'absence de tout virus contaminant auxiliaire ou de tout virus du type sauvage. Ladite méthode consiste à cultiver une cellule hôte de mammifère contenant un transgène flanqué de répétitions terminales inversées du virus adéno-associé (AAV) et soumis à l'action de séquences régulatrices dictant son expression, une séquence d'AAV rep et une séquence AAV cap soumises à l'action de séquences régulatrices dictant leur expression; et l'ADN d'adénovirus minimum nécessaire à l'expression d'un produit génique E1a, d'un produit génique E1b et d'un produit génique E2a; et à en isoler un AAV recombiné exprimant le transgène en l'absence de tout virus contaminant auxiliaire ou de tout AAV du type sauvage. Cette méthode permet d'éviter l'étape postérieure de purification destinée à purifier l'AAV recombiné de tout virus contaminant. L'invention concerne également diverses réalisations de la cellule hôte.
Gao Guang-Ping
Wilson James M.
Gowling Lafleur Henderson Llp
The Trustees Of The University Of Pennsylvania
LandOfFree
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