C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/67 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01)
Patent
CA 2364267
The present invention is directed generally to activating gene expression or causing over-expression of a gene by recombination methods in situ. The invention also is directed generally to methods for expressing an endogenous gene in a cell at levels higher than those normally found in the cell. In one embodiment of the invention, expression of an endogenous gene is activated or increased following integration into the cell, by non-homologous or illegitimate recombination, of a regulatory sequence that activates expression of the gene. In another embodiment, the expression of the endogenous gene may be further increased by co-integration of one or more amplifiable markers, and selecting for increased copies of the one or more amplifiable markers located on the integrated vector. In another embodiment, the invention is directed to activation of endogenous genes by non-targeted integration of specialized activation vectors, which are provided by the invention, into the genome of a host cell. The invention also provides methods for the identification, activation, isolation, and/or expression of genes undiscoverable by current methods since no target sequence is necessary for integration. The invention also provides methods for isolation of nucleic acid molecules (particularly cDNA molecules) encoding a variety of proteins, including transmembrane proteins, and for isolation of cells expressing such transmembrane proteins which may be heterologous transmembrane proteins. The invention also is directed to isolated genes, gene products, nucleic acid molecules, to compositions comprising such genes, gene products and nucleic acid molecules, and to vectors and host cells comprising such genes and nucleic acid molecules, that may be used in a variety of therapeutic and diagnostic applications. Thus, by the present invention, endogenous genes, including those associated with human disease and development, may be activated and isolated without prior knowledge of the sequence, structure, function, or expression profile of the genes.
L'invention concerne l'activation de l'expression génétique ou la réalisation d'une sur-expression d'un gène par des méthodes de recombinaison in situ. L'invention concerne également des méthodes d'expression d'un gène endogène dans une cellule à des niveaux supérieurs à ceux habituellement présents dans une cellule. Dans un mode de réalisation, l'expression d'un gène endogène est activée ou augmentée suite à l'intégration dans une cellule, par recombinaison non homologue ou illégitime, d'une séquence régulatrice qui active l'expression du gène. Dans un autre mode de réalisation, l'expression du gène endogène peut être augmentée davantage par la co-intégration d'au moins un marqueur amplifiable et par la sélection de copies accentuées desdits marqueurs situés sur le vecteur intégré. Dans un autre mode de réalisation encore, l'invention concerne l'activation de gènes endogènes par l'intégration non ciblée de vecteurs d'activation spécialisés dans le génome d'une cellule hôte. L'invention concerne également des méthodes d'identification, d'activation, d'isolation et/ou d'expression de gènes que l'on ne peut découvrir selon les méthodes connues puisqu'aucune séquence cible n'est nécessaire en vue de l'intégration. L'invention concerne aussi des méthodes permettant d'isoler des molécules d'acide nucléique (en particulier des molécules d'ADNc) codant pour diverses protéines, notamment des protéines transmembranaires, et des cellules exprimant ces protéines qui peuvent être des protéines transmembranaires hétérologues. L'invention concerne par ailleurs des gènes isolés, des produits géniques, des molécules d'acide nucléique, des compositions contenant ces gènes, ces produits géniques, ces molécules d'acide nucléique ainsi que des vecteurs et des cellules hôtes contenant ces gènes et ces molécules d'acide nucléique peuvant être utilisés dans diverses applications thérapeutiques et diagnostiques. Ainsi, on peut activer et isoler par le procédé de l'invention, des gènes endogènes, dont ceux associés à la maladie humaine et au développement humain, sans qu'il soit nécessaire de connaître préalablement la séquence, la structure, la fonction ou le profil d'expression des gènes.
Harrington John J.
Rundlett Stephen
Sherf Bruce
Athersys Inc.
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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