C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C07H 1/06 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C12N 1/06 (2006.01)
Patent
CA 2266853
A composition for isolating plasmid DNA from a bacterial culture is disclosed, the composition containing at least about 3 M magnesium chloride and about 10 % (w/v) polyethylene glycol. A method of differentially precipitating plasmid DNA from a bacterial lysate is also disclosed, involving the steps of lysing bacterial cells to obtain a bacterial lysate; mixing magnesium chloride and polyethylene chloride with the lysate to form a mixture containing at least about 1 M magnesium chloride and about 3.3 % (w/v) polyethylene glycol, thereby precipitating cellular debris, chromosomal DNA, cellular RNA, and proteins; separating and removing the precipitated material to form a cleared lysate; mixing magnesium chloride and polyethylene glycol with the cleared lysate to form a mixture containing at least about 1.5 M magnesium chloride and about 5 % (w/v) polyethylene chloride, thereby precipitating plasmid DNA; and separating the precipitated plasmid DNA from the mixture, thereby obtaining isolated plasmid DNA. Another composition according to the invention contains an enzyme for digestion of cellular RNA, a stabilizer for protecting plasmid DNA from nuclease digestion, and a precipitating agent for precipitating plasmid DNA. Another method of isolating plasmid DNA from a bacterial culture comprises simultaneously digesting cellular RNA in a clarified lysate with an enzyme, protecting plasmid DNA from nuclease digestion, and precipitating plasmid DNA.
Cette invention se rapporte à une composition utilisée pour isoler de l'ADN plasmidique dans une culture bactérienne. Cette composition contient au moins 3 moles environ de chlorure de magnésium et 10 % en poids environ de polyéthylène glycol. L'invention se rapporte à un procédé permettant d'obtenir une précipitation sélective D'ADN plasmidique à partir d'un lysat bactérien, qui consiste à lyser des cellules bactériennes de façon à produire un lysat bactérien; à mélanger au lysat du chlorure de magnésium et du polyéthylène glycol de façon à obtenir un mélange contenant au moins 1 mole environ de chlorure de magnésium et 3,3 % en poids environ de polyéthylène glycol, ce qui permet la précipitation de débris cellulaires, d'ADN chromosomique, d'ARN cellulaire et de protéines; à séparer et à extraire la matière précipitée de façon à obtenir un lysat transparent; à mélanger du chlorure de magnésium et du polyéthylène glycol au lysat transparent de manière à former un mélange contenant au moins 1,5 mole environ de chlorure de magnésium et 5 % en poids environ de polyéthylène glycol, ce qui permet la précipitation de l'ADN plasmidique; et à séparer du mélange l'ADN plasmidique précipité, ce qui permet d'obtenir l'ADN plasmidique isolé. Une autre composition conforme à l'invention contient un enzyme de digestion de l'ARN cellulaire, un stabilisateur servant à protéger l'ADN plasmidique de la digestion par des nucléases, et un agent de précipitation assurant la précipitation de l'ADN plasmidique. Un autre procédé d'isolement d'ADN plasmidique à partir d'une culture bactérienne consiste à assurer simultanément la digestion d'ARN cellulaire dans un lysat clarifié par un enzyme, la protection de l'ADN plasmidique vis à vis d'une digestion par des nucléases et la précipitation d'ADN plasmidique.
Chen Zhidong
Ruffner Duane
Smart & Biggar
University Of Utah Research Foundation
LandOfFree
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