Compositions and methods for rapidly generating recombinant...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 9/90 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/66 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2430886

A method of generating a double stranded (ds) recombinant nucleic acid molecule covalently linked in both strands by contacting two or more ds nucleotide sequences with a topoisomerase under conditions such that both termini of at least one end of a first ds nucleotide sequence are covalently linked by the topoisomerase to both termini of at least one end of a second ds nucleotide sequence is provided. Also provided is a method for generating a ds recombinant nucleic acid molecule covalently linked in one strand, by contacting two or more ds nucleotide sequences with a type IA topoisomerase under conditions such that one strand, but not both strands, of one or both ends of a first ds nucleotide sequence are covalently linked by the topoisomerase. Compositions for performing such methods, and compositions generated from such methods also are provided, as are kits containing components useful for conveniently practicing the methods.

L'invention concerne une méthode permettant de produire une molécule d'acide nucléique recombinée double brins liée par covalence dans les deux brins par contact d'au moins deux séquences nucléotidiques ds avec une topoisomérase, dans des conditions telles que les deux terminaisons d'au moins une extrémité d'une première d'une séquence nucléotidique ds sont liées par covalence par la topoisomérase aux deux terminaisons d'au moins une extrémité d'une seconde séquence nucléotidique ds. L'invention concerne également une méthode permettant de produire une molécule d'acide nucléique recombinée ds liée par covalence dans un seul brin, par contact d'au moins deux séquences nucléotidiques ds avec une topoisomérase de type IA, dans des conditions telles qu'un seul brin et non les deux d'une extrémité ou des deux extrémités d'une première séquence nucléotidique est lié par covalence par la topoisomérase. L'invention concerne également des compositions permettant de mettre lesdites méthodes en oeuvre, des compositions produites à l'aide de ces méthodes ainsi que des kits contenant des composants utiles pour mettre en oeuvre les méthodes de l'invention.

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