Compositions and methods for stable isotope labelling of...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 1/00 (2006.01) C07B 59/00 (2006.01) C12N 5/00 (2006.01) C12P 13/04 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2532038

The present invention is concerned the labelling of biological compounds with stable isotopes such that the three-dimensional structure of the biological compounds may be analysed by e.g. NMR spectroscopy. The invention employs microorganisms that are grown on mineral media comprising carbon and nitrogen sources that contain stable isotopes to produce biomass that is uniformly labelled with stable isotopes. The biomass may be autolysed to produce an autolysate. The biomass may further be extracted with organic solvent to produce lipids. The (delipidised) biomass is hydrolysed to produce labelled amino acids and other nutrients, which are used together with the autolysate, extracted lipids and further components to compose a culture medium for a mammalian or insect host cells for the production of biological compounds that are uniformly labelled with stable isotopes. The biological compound preferably is a biological acromolecule, such as e.g. a mammalian membrane protein.

La présente invention se rapporte au marquage de composés biologiques avec des isotopes stables permettant l'analyse, par exemple, par spectroscopie NMR, de la structure tridimensionnelle de ces composés biologiques. L'invention met en oeuvre des micro-organismes qui sont cultivés sur des supports minéraux comportant des sources de carbone et d'azote qui contiennent des isotopes stables aux fins de la production de biomasse qui soit uniformément marquée avec les isotopes stables. La biomasse peut être autolysée pour produire un autolysat. Cette biomasse peut également être extraite avec un solvant organique pour produire des lipides. La biomasse (délipidisée) est hydrolysée pour produire des acides aminés marqués ainsi que d'autres éléments nutritifs, qui sont utilisés conjointement à l'autolysat de lipides extraits et d'autres composants pour composer un support de culture pour des cellules hôtes d'insecte ou de mammifère aux fins de la production de composés biologiques qui sont uniformément marqués avec des isotopes stables. Le composé biologique est de préférence une macromolécule biologique, telle qu'une protéine membranaire de mammifère.

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